आवेदन पत्र

सोडियम फॉस्फेट बफर का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है क्योंकि यह कोशिकाओं के लिए आइसोटोनिक और गैर विषैले होता है। कोशिकाओं युक्त कंटेनरों को कुल्ला करने के लिए, पीबीएस का उपयोग पदार्थों को भंग करने के लिए किया जाता है।

खाना बनाना

सोडियम फॉस्फेट बफर तैयार करने के कई तरीके हैं। कुछ सूत्रों में पोटेशियम नहीं होता है, अन्य में कैल्शियम या मैग्नीशियम होता है।

1 लीटर एकल सोडियम फॉस्फेट बफर तैयार करने के लिए, उपयोग करें:

• 8.00 ग्राम NaCl
• 0.20 ग्राम KCl
• 1.44 ग्राम ना 2 एचपीओ 4
• 0.24 ग्राम KH2PO4
• आसुत जल के 800 मिलीलीटर में भंग
• हाइड्रोक्लोरिक एसिड या सोडियम हाइड्रोक्साइड के साथ पीएच को 7.4 में समायोजित करें
• 1 लीटर में आसुत जल डालें।

आठ लीटर आसुत जल में 800 ग्राम NaCl, 20 ग्राम KCl, 144 ग्राम Na 2 HPO 4 और 24 ग्राम KH 2 PO 4 को घोलकर दस गुना पीबीएस का दस लीटर स्टॉक घोल तैयार किया जा सकता है। आगे दस लीटर तक। परिणामी समाधान का पीएच लगभग 6.8 होगा, लेकिन एक पीबीएस के कमजोर पड़ने के बाद 7.4 के बराबर होगा। घोल तैयार करने के बाद पीएच मान को पीएच मीटर से जांच लें। यदि आवश्यक हो, तो पीएच को हाइड्रोक्लोरिक एसिड या सोडियम हाइड्रोक्साइड के साथ समायोजित किया जा सकता है।

सोडियम फॉस्फेट बफर तैयार करने का सबसे आसान तरीका व्यावसायिक रूप से उपलब्ध टैबलेट फॉर्मूलेशन का उपयोग करना है। ऐसी गोलियों को आसुत जल के साथ एक पूर्व निर्धारित मात्रा में पतला किया जाता है और एक पूर्व निर्धारित सांद्रता का घोल प्राप्त किया जाता है।

सेल संस्कृतियों के लिए, समाधान को आटोक्लेविंग (तरल मोड में 121 डिग्री सेल्सियस पर 20 मिनट) द्वारा विभाज्य और निष्फल किया जाना चाहिए। उपयोग के आधार पर नसबंदी आवश्यक नहीं है। सोडियम फॉस्फेट बफर को कमरे के तापमान पर स्टोर करना संभव है, लेकिन बैक्टीरिया के विकास को रोकने के लिए रेफ्रिजरेटर में गैर-बाँझ बफर के दीर्घकालिक भंडारण की सिफारिश की जाती है। ठंडा करने के दौरान केंद्रित स्टॉक समाधानों में नमक हो सकता है, इसलिए, उपयोग करने से पहले, कमरे के तापमान पर केंद्रित समाधान को गर्म करने की सिफारिश की जाती है और अवक्षेप को पूरी तरह से भंग करने की प्रतीक्षा करें।

टिप्पणियाँ

यह सभी देखें

विकिमीडिया फाउंडेशन। 2010.

फॉस्फेट बफर खारा: 10X . का 1L

विवरण

पीबीएस: 10X का 1 एल (फॉस्फेट बफर्ड सेलाइन) एक केंद्रित बफर सॉल्यूशन है जो आमतौर पर जैविक अनुसंधान में उपयोग किए जाने वाले 1X पीबीएस वर्किंग सॉल्यूशन को कमजोर करने के लिए तैयार है। पीबीएस बफर एक निरंतर पीएच बनाए रखने के लिए आदर्श है, और चूंकि यह कोशिकाओं के लिए आइसोटोनिक और गैर-विषाक्त है, इसलिए इसका उपयोग विभिन्न प्रकार के जैविक अनुप्रयोगों में किया जा सकता है। पीबीएस को अक्सर धोने और कमजोर पड़ने वाले बफर के रूप में उपयोग किया जाता है, और प्रोटीन सोखना को मापने के दौरान एक संदर्भ स्पेक्ट्रम लेने के लिए भी इसका उपयोग किया जाता है।

प्रयोग

उपयोग करने से पहले, एक 1X समाधान के लिए पतला और एक 0.22 µm फिल्टर के माध्यम से एक बाँझ कुप्पी में फिल्टर । 0.01 एम, 0.027 एम पोटेशियम क्लोराइड, 0.137 एम सोडियम क्लोराइड, और 1.76 एमएम पोटेशियम फॉस्फेट के फॉस्फेट बफर एकाग्रता के साथ 1एक्स पीबीएस बफर के 10 एल बनाता है। पीबीएस समाधान पीएच लगभग 7.4 होगा ।
. यदि सेल संस्कृति अनुप्रयोगों में बफर का उपयोग किया जाता है, तो समाधान की नसबंदी आवश्यक हो सकती है। पूर्व-पतला बफर को एलिकोट्स में भेजा जा सकता है और ऑटोक्लेविंग (20 मिनट, 121 डिग्री सेल्सियस, तरल चक्र) द्वारा निष्फल किया जा सकता है।
. पीबीएस को कमरे के तापमान पर संग्रहीत किया जा सकता है, लेकिन गैर-बाँझ समाधान समय के साथ बैक्टीरिया के विकास को रोकने के लिए प्रशीतन की गारंटी दे सकते हैं। ठंडा होने पर केंद्रित स्टॉक समाधान वर्षा कर सकते हैं और कमरे के तापमान पर रखा जाना चाहिए जब तक कि उपयोग से पहले वर्षा पूरी तरह से भंग न हो जाए।

तकनीकी जानकारी

पीएच:	जब एक 1X एकाग्रता के लिए पतला, पीएच ~ 7.4 होगा ।
भंडारण:	कमरे के तापमान पर रखो

पर्याय:	फॉस्फेट प्रतिरोधी लवण
आवेदन पत्र:	आमतौर पर जैविक अनुसंधान में उपयोग किया जाने वाला एक बफर समाधान

आदेश की जानकारी

उपयोग का क्षेत्र:	उत्पादन:	सांताक्रूज
	तरीका:
	मात्रा:	1 ली
	बिल्ली। कमरा:	एससी-24946
मूल्य (वैट 20% के साथ):	अनुरोध पर	कार्ट में जोड़ें
नाम: बफर पीबीएस (फॉस्फेट बफर खारा), 10X, 1 एल / फॉस्फेट बफर खारा: 10X का 1 एल। नोट: प्रजाति विशिष्टता:। विवरण: । आवेदन पत्र: । नीली बर्फ पर वितरण, कमरे के तापमान पर भंडारण,

रक्त लेना, "पतला धब्बा" और "मोटी बूंद" तैयार करना

बैक्टीरिया की आवाजाही। फ्लैगेलम की संरचना, मोटाई, लंबाई, रासायनिक संरचना। सूक्ष्मजीवों की जीवित कोशिकाओं की निश्चित तैयारी और तैयारी की तैयारी।

रासायनिक रूप से शुद्ध अभिकर्मकों का उपयोग बफर समाधान तैयार करने के लिए किया जाता है। और विश्लेषणात्मक ग्रेड, विशेष रूप से तैयार। अभिकर्मक निम्नानुसार तैयार किए जाते हैं।

पोटेशियम फॉस्फेट मोनोसबस्टिट्यूटेड, केएच 2 पीओ 4 , आणविक भार 136.09। 150 मिलीलीटर पानी में उबालने पर 100 ग्राम दवा घोल दी जाती है। घोल को गर्म फ़िल्टर किया जाता है। लगातार हिलाते हुए, छानना 10 तक ठंडा हो जाता है। फिर 150 मिलीलीटर एथिल अल्कोहल मिलाएं। निस्यंद को लगातार हिलाते रहने से अलग किए गए क्रिस्टल को सक्शन फ़नल पर फ़िल्टर किया जाता है और उन्हीं परिस्थितियों में फिर से क्रिस्टलीकृत किया जाता है; क्रिस्टल 105...110 पर स्थिर भार तक सूख जाते हैं। 99.9 ... 100.0% की सीमा में मुख्य पदार्थ की सामग्री के साथ तैयारी की उपस्थिति में, पदार्थ की प्रारंभिक तैयारी नहीं की जाती है।

विघटित सोडियम फॉस्फेट, Na 2 HPO 4 12H 2 O, आणविक भार 358.12। दवा तैयार करने के दो तरीके हैं।

क) 150 ग्राम दवा को 100 0 सी तक गर्म करने पर 150 मिली पानी में घोल दिया जाता है। घोल को गर्म करके छान लिया जाता है और ठंडा होने के बाद अवक्षेपित क्रिस्टल को छान लिया जाता है। 100 तक गर्म करके पुन: क्रिस्टलीकरण दोहराया जाता है। पुन: क्रिस्टलीकृत तैयारी को चीनी मिट्टी के बरतन कप में पानी के स्नान में लगातार हिलाते हुए गर्म किया जाता है जब तक कि तैयारी पूरी तरह से सूख न जाए। परिणामस्वरूप नमक को दिन के दौरान फ़्यूज्ड कैल्शियम क्लोराइड के ऊपर एक desiccator में सुखाया जाता है। पुनर्रचित तैयारी (Na 2 HPO 4 ·2H 2 O) में, मुख्य पदार्थ की सामग्री की जाँच की जाती है। ऐसा करने के लिए, 50 मिलीलीटर पानी में लगभग 0.5000 ग्राम दवा को भंग कर दिया जाता है, 2 ... 3 मिलीलीटर संतृप्त सोडियम क्लोराइड समाधान जोड़ा जाता है और मिथाइल रेड के संकेतक की उपस्थिति में 0.1 एन हाइड्रोक्लोरिक एसिड समाधान के साथ शीर्षक दिया जाता है। . यदि आवश्यक हो, तो नमूने के आकार में समायोजन करें। ठीक 0.1 एन हाइड्रोक्लोरिक एसिड का 1 मिलीलीटर Na 2 HPO 4 2H 2 O के 0.0178 ग्राम से मेल खाता है।

बी) दवा का 75 ग्राम 250 मिलीलीटर पानी में 60 तक गर्म किया जाता है। घोल को गर्म फ़िल्टर किया जाता है, छानना 10 तक लगातार हिलाते हुए ठंडा किया जाता है। अवक्षेपित क्रिस्टल को सक्शन फ़नल पर फ़िल्टर किया जाता है और उन्हीं परिस्थितियों में फिर से क्रिस्टलीकृत किया जाता है। परिणामी नमक को पहले 24 घंटे के लिए 30 से अधिक नहीं के तापमान पर सुखाया जाता है, फिर इसे ओवन में 50 पर 3-4 घंटे के लिए सुखाना जारी रखा जाता है, और अंत में 120 ± 5 पर निरंतर वजन, नमक को रोकने के लिए पिघलना सुखाने के बाद, नमक में Na 2 HPO 4 की संरचना होती है।

अभिकर्मकों को तैयार करने के बाद, पोटेशियम फॉस्फेट मोनोसबस्टिट्यूटेड और सोडियम फॉस्फेट को प्रतिस्थापित करके स्टॉक समाधान तैयार किए जाते हैं।

निर्जल पोटेशियम फॉस्फेट मोनोसबस्टिट्यूटेड KH 2 PO 4 का वजन 9.078 ग्राम पानी में घोला जाता है और घोल की मात्रा 1 लीटर तक समायोजित की जाती है। घोल को स्थिर करने के लिए टोल्यूनि की 3-4 बूंदें डालें।

सोडियम फॉस्फेट का एक हिस्सा Na 2 HPO 4 12H 2 O, जिसका वजन 11.876 ग्राम है, को पानी में घोल दिया जाता है और घोल की मात्रा 1 लीटर तक समायोजित कर ली जाती है। घोल को स्थिर करने के लिए टोल्यूनि की 3-4 बूंदें डालें।

प्रारंभिक समाधानों से तालिका A.2 के अनुसार 4.94 से 9.18 के पीएच के साथ फॉस्फेट बफर समाधान तैयार करें ।

तालिका A.2 - 4.94 के पीएच के साथ फॉस्फेट बफर समाधान ... 9.18

पीएच	ना 2 एचपीओ 4 12 एच 2 ओ समाधान, एमएल	केएच 2 पीओ 4 समाधान, एमएल
4,94	1,0	99,0
5,29	2,5	97,5
5,59	5,0	95,0
5,91	10,0	90,0
6,24	20,0	80,0
6,47	30,0	70,0
6,64	40,0	60,0
6,81	50,0	50,0
6,98	60,0	40,0
7,17	70,0	30,0
7,38	80,0	20,0
7,73	90,0	10,0
8,04	95,0	5,0
8,34	97,5	2,5
8,67	99,0	1,0
9,18	100,0	0,0

जोड़ी गई तिथि: 2015-08-06 | दृश्य: 4058 |

कार्य 8. रक्त सीरम में प्रोटीन का मात्रात्मक निर्धारण

4. जटिल प्रोटीन की संरचना और गुण

कार्य 9. हेमप्रोटीन की रासायनिक प्रकृति

कार्य 10. ग्लाइकोप्रोटीन के कार्बोहाइड्रेट घटक की पहचान

कार्य 11. फॉस्फोप्रोटीन के लिए गुणात्मक प्रतिक्रियाएं

कार्य 12. हेस विधि द्वारा रक्त सीरम में सियालिक एसिड की मात्रा का मात्रात्मक निर्धारण

कार्य 13. न्यूक्लियोप्रोटीन की रासायनिक प्रकृति

न्यूक्लिक एसिड

1. न्यूक्लिक एसिड की रासायनिक प्रकृति का अध्ययन

कार्य 14. न्यूक्लिक एसिड घटकों के लिए गुणात्मक प्रतिक्रियाएं

न्यूक्लिक एसिड के निर्धारण के लिए मात्रात्मक तरीके

कार्य 15. एएस स्पिरिन के अनुसार न्यूक्लिक एसिड के मात्रात्मक निर्धारण के लिए स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक विधि

कार्य 16. न्यूक्लिक अम्लों के मात्रात्मक निर्धारण के लिए फोटोकलरिमेट्रिक विधियाँ

कार्य 17. फॉस्फोलिपिड्स का अध्ययन

कार्य 18. स्टेरॉयड के लिए गुणात्मक प्रतिक्रियाएं

एंजाइमों

एंजाइमों और गैर-जैविक उत्प्रेरकों की तुलनात्मक क्रिया

कार्य 19. स्टार्च हाइड्रोलिसिस की प्रतिक्रिया पर लार और हाइड्रोक्लोरिक एसिड के α-amylase की क्रिया की तुलना

2. विभिन्न वर्गों से संबंधित एंजाइमों की पहचान

कार्य 20. जैविक सामग्री में ऑक्सीडाइरेक्टेस का पता लगाना

कार्य 21. कोलेलिनेस्टरेज़ का पता लगाना

रक्त सीरम में Herzfeld और Stumpf . की एक्सप्रेस विधि द्वारा

कार्य 22. वी.आई. टोवार्नित्सकी और ई.एन. वॉल्युस्काया की विधि के अनुसार रक्त सीरम में फ्रुक्टोज-1,6-बिस्फोस्फेट एल्डोलेज की गतिविधि का निर्धारण

अंशांकन ग्राफ का निर्माण

कार्य 23. ग्लूकोज फॉस्फेट आइसोमेरेज़ का निर्धारण

रक्त सीरम में

3. एंजाइमों के गतिज गुणों का अध्ययन

कार्य 24. लार α-amylase . के उदाहरण पर एंजाइमी प्रतिक्रियाओं के कैनेटीक्स

4. एंजाइम क्रिया की विशिष्टता

कार्य 25. पूर्ण सब्सट्रेट विशिष्टता का प्रदर्शन

5. एंजाइम गतिविधि संशोधक

कार्य 27. लार के सक्रियकर्ता और अवरोधक α-amylase

मांसपेशियों का ऊतक

कार्य 29. रक्त उत्प्रेरित का गैर-प्रतिस्पर्धी निषेध

6. एंजाइम गतिविधि की मात्रा

कार्य 30. कोर्नबर्ग के अनुसार दवा लैक्टेट डिहाइड्रोजनेज की गतिविधि का मात्रात्मक अध्ययन

कार्य 31. सेवेल और टोवरेक के अनुसार रक्त सीरम में लैक्टेट डिहाइड्रोजनेज की गतिविधि का अध्ययन करने के लिए फोटोकलरिमेट्रिक विधि

काम 32. Bodansky के अनुसार रक्त सीरम में क्षारीय फॉस्फेट गतिविधि का निर्धारण

7. आइसोनाइजेस का अध्ययन

कार्य 33. डायट्ज़ और लुब्रानो के अनुसार पॉलीएक्रिलामाइड जेल में वैद्युतकणसंचलन द्वारा रक्त सीरम के लैक्टेट डिहाइड्रोजनेज आइसोनिजाइम का पृथक्करण

कार्य 34. रक्त सीरम में -glutamyltransferase की गतिविधि का निर्धारण

पाचन की जैव रसायन

कार्य 35. आमाशय रस के अम्लीय घटकों का अध्ययन

काम 36. डायग्नोस्टिक किट "एसिडोटेस्ट" के साथ गैस्ट्रिक जूस की अम्लता का निर्धारण

काम 37. पाचन तंत्र के एंजाइमों द्वारा प्रोटीन हाइड्रोलिसिस

कार्य 38. अग्नाशयी लाइपेस की क्रिया के तहत ट्राईसिलेग्लिसरॉल के हाइड्रोलिसिस की गतिशीलता का अध्ययन

ऊर्जा विनिमय (बायोएनेर्जी)

1. जंतु ऊतकों में जैविक ऑक्सीकरण प्रक्रियाओं का अध्ययन कार्य 39. पेशी ऊतक में साइटोक्रोम ऑक्सीडेज का पता लगाना

कार्य 40. ऑक्सीडेटिव फास्फारिलीकरण की प्रक्रिया और उस पर अयुग्मकों की क्रिया का प्रदर्शन

कार्य 41. मांसपेशी ऊतक में ग्लाइकोलाइसिस का पता लगाना

कार्य 42. आयन-विनिमय पतली परत क्रोमैटोग्राफी द्वारा एडेनिन न्यूक्लियोटाइड का विश्लेषण

कार्य 43. एन्नोर और रोसेनबर्ग के अनुसार रक्त सीरम में क्रिएटिन फॉस्फोकाइनेज गतिविधि का निर्धारण

प्रकाश संश्लेषक जीवों के वर्णक और ऑक्सीडेटिव प्रक्रियाओं का विश्लेषण

कार्य 44. वर्णक पौधों के लिए गुणात्मक प्रतिक्रियाएं

कार्य 45. ए.एन. बोयार्किन की विधि के अनुसार पादप सामग्री में पेरोक्सीडेज गतिविधि का निर्धारण

कार्बोहाइड्रेट चयापचय

कार्य 46. रक्त में ग्लूकोज का निर्धारण

कार्य 47. ग्लूकोज ऑक्सीडेज विधि द्वारा रक्त में ग्लूकोज का मात्रात्मक निर्धारण

कार्य 48. बार्कर और समरसन के अनुसार रक्त में लैक्टिक एसिड की मात्रा का निर्धारण

कार्य 49. फ्रीडेमैन और हौगेन के अनुसार रक्त में पाइरुविक अम्ल की मात्रा का निर्धारण

लिपिड चयापचय

काम 50

काम 51

कार्य 52. इल्क की विधि के अनुसार रक्त सीरम में कोलेस्ट्रॉल का निर्धारण

कार्य 53. रक्त सीरम में कुल फॉस्फोलिपिड की सामग्री का निर्धारण

कार्य 54. पतली परत क्रोमैटोग्राफी द्वारा रक्त सीरम लिपिड का पृथक्करण

प्रोटीन और अमीनो एसिड का चयापचय

कार्य 55. टर्बिडीमेट्रिक विधि द्वारा रक्त सीरम के प्रोटीन अंशों की सामग्री का निर्धारण

कार्य 56. ए.ए. पोक्रोव्स्की, ए.आई. अर्चाकोव और ओ.एन. के अनुसार रक्त सीरम में कैथेप्सिन की गतिविधि का निर्धारण।

कैथेप्सिन

कार्य 57. रीटमैन और फ्रेनकेल के अनुसार रक्त सीरम में एस्पार्टेट और ऐलेनिन एमिनोट्रांस्फरेज की गतिविधि का निर्धारण

कार्य 58. ताबोर और मेहलर के अनुसार रक्त सीरम में हिस्टिडेस गतिविधि का निर्धारण, वी.ए. द्वारा संशोधित।

कार्य 59. न्यूमैन और लोगान के अनुसार मूत्र में मुक्त हाइड्रॉक्सीप्रोलाइन की सामग्री का निर्धारण, पी द्वारा संशोधित।

नाइट्रोजन युक्त गैर-प्रोटीन पदार्थों का चयापचय

1. नाइट्रोजन चयापचय के सामान्य उत्पादों का अध्ययन

कार्य 60. photocolorimetric विधि द्वारा रक्त में अवशिष्ट नाइट्रोजन का मात्रात्मक निर्धारण

कार्य 61. रक्त सीरम और मूत्र में यूरिया का मात्रात्मक निर्धारण

कार्य 62. ब्राउन की विधि द्वारा क्रिएटिन और क्रिएटिनिन का मात्रात्मक निर्धारण

2. न्यूक्लिक एसिड और न्यूक्लियोटाइड्स के आदान-प्रदान का अध्ययन

कार्य 63. ए.ए. के अनुसार रक्त सीरम में एसिड डीऑक्सीराइबोन्यूक्लिज़ (dnCase) की गतिविधि का निर्धारण।

कार्य 64. मुलर और सीफर्ट की विधि के अनुसार रक्त सीरम में यूरिक एसिड की मात्रा का निर्धारण

3. पोर्फिरिन (वर्णक) चयापचय का अध्ययन

कार्य 65. येंद्राशिक, क्लेघोर्न और ग्रोफ के अनुसार रक्त सीरम में बिलीरुबिन और उसके अंशों का निर्धारण

आण्विक विकृति

1. अमीनो एसिड चयापचय की विकृति के निदान को व्यक्त करें कार्य 66. हाइपरमिनोएसिडुरिया का पता लगाना

कार्य 67. फेनिलकेटोनुरिया के निदान के लिए एक्सप्रेस तरीके:

कार्य 68. tyrosinosis का निदान tyrosine के लिए Millon परीक्षण

कार्य 69. होमोगेंटिसिक एसिड के परीक्षण द्वारा एल्केप्टोनुरिया का पता लगाना

काम 70

2. कार्बोहाइड्रेट चयापचय के विकृति के निदान को व्यक्त करें कार्य 71. बायल परीक्षण द्वारा पेंटोसुरिया का पता लगाना

कार्य 72. सेलिवानोव के परीक्षण द्वारा फ्रुक्टोसुरिया का पता लगाना

कार्य 73. म्यूकोपॉलीसेकेराइड्स के लिए टोल्यूडीन ब्लू के साथ एक परीक्षण द्वारा म्यूकोपॉलीसेकेराइड्स का पता लगाना

कार्य 74. मूत्र में पोर्फोबिलिनोजेन की सामग्री का निर्धारण

कार्य 75. मूत्र में डेल्टा-एमिनोलेवुलिनिक एसिड की सामग्री का मात्रात्मक निर्धारण

काम 76

चयापचय नियामक

1. विटामिन का अध्ययन कार्य 77. विटामिन के लिए गुणात्मक प्रतिक्रियाएं

कार्य 78. मल्टीविटामिन की तैयारी में फ्लोरीमेट्रिक विधि द्वारा थायमिन और राइबोफ्लेविन की सामग्री का निर्धारण

कार्य 79. औषधीय पौधों में एस्कॉर्बिक एसिड का मात्रात्मक निर्धारण

2. हार्मोन, मध्यस्थों और उनके चयापचयों का अध्ययन

कार्य 80. प्रोटीन-पेप्टाइड हार्मोन के लिए गुणात्मक प्रतिक्रियाएं।

कार्य 81. हार्मोन के लिए गुणात्मक प्रतिक्रियाएं - अमीनो एसिड के डेरिवेटिव

कार्य 82. स्टेरॉयड हार्मोन और उनके मेटाबोलाइट्स के लिए गुणात्मक प्रतिक्रियाएं

कार्य 83. पशुओं के रक्त में ग्लूकोज के इंसुलिन और एड्रेनालाईन के स्तर का विनियमन

काम 84. एन.वी. क्लिमकिना और एस.आई. प्लिटमैन के अनुसार डायज़ोटाइज्ड एन-नाइट्रोएनिलिन के साथ रक्त में हिस्टामाइन का मात्रात्मक निर्धारण

जैविक तरल पदार्थों का अध्ययन

1. जैव रासायनिक रक्त परीक्षण कार्य 85. रक्त में हीमोग्लोबिन की मात्रा का उसके प्रकाश अवशोषण द्वारा निर्धारण

कार्य 86. मानव एरिथ्रोसाइट्स में भ्रूण हीमोग्लोबिन की सामग्री का निर्धारण

कार्य 87. फोटोकलरिमेट्रिक विधि द्वारा एरिथ्रोसाइट्स में ग्लाइकोसिलेटेड हीमोग्लोबिन की सामग्री का निर्धारण

कार्य 88. फोटोकलरिमेट्रिक विधि द्वारा रक्त सीरम में हैप्टोग्लोबिन की एकाग्रता का निर्धारण

काम 89

कार्य 90. रक्त सीरम में α-amylase गतिविधि का निर्धारण एमाइलोक्लास्टिक विधि द्वारा किया जाता है

कार्य 91. म्यूरेक्साइड विधि द्वारा रक्त सीरम में कैल्शियम की मात्रा का निर्धारण

कार्य 92. ह्यूर्गो और पॉपर के अनुसार थाइमोल परीक्षण

कार्य 93. उदात्त-तलछटी प्रतिक्रिया

कार्य 94. रक्त सीरम में लौह सामग्री का मात्रात्मक निर्धारण

2. मूत्र का जैव रासायनिक अध्ययन

कार्य 95. मूत्र के भौतिक-रासायनिक गुणों का अध्ययन

कार्य 96. मूत्र में कीटोन निकायों और ग्लूकोज का निर्धारण

कार्य 97. ब्रैंडेनबर्ग-रॉबर्ट्स-स्टोलनिकोव विधि द्वारा मूत्र में प्रोटीन का निर्धारण

कार्य 98. मूत्र में इंडिकन का गुणात्मक निर्धारण

कार्य 99. मूत्र में कुछ रंजकों का पता लगाना।

ज़ेनोबायोटिक्स का चयापचय

एक्सनोबायोटिक्स के ऑक्सीकरण और संयुग्मन की प्रक्रियाओं का अध्ययन कार्य 100. सूक्ष्म जीवों की श्वसन गतिविधि का खुलासा

कार्य 101. हमारे अनुसार लीवर माइक्रोसोम में ऑक्सीडेटिव एन-डीमेथिलेशन का अध्ययन

कार्य 102. काटो और गिलेट के अनुसार लीवर माइक्रोसोम की हाइड्रॉक्सिलस गतिविधि का निर्धारण

नौकरी 103

कार्य 104. शकुर्स्की एट अल के अनुसार रक्त सीरम में अल्कोहल डिहाइड्रोजनेज की गतिविधि का निर्धारण।

काम 105

कार्य 106. शरीर में आइसोनिकोटिनिक एसिड हाइड्राजाइड (जिंक) के एसिटिलीकरण (निष्क्रियता) का पता लगाना

जैविक झिल्लियों के लिपिड पेरोक्सीडेशन का अध्ययन

कार्य 107. पेरोक्साइड हेमोलिसिस के लिए एरिथ्रोसाइट्स की संवेदनशीलता का निर्धारण

कार्य 108. बायोमेम्ब्रेन में लिपिड पेरोक्सीडेशन की दर का निर्धारण

आवेदन पत्र

2. रक्त प्लाज्मा के जैव रासायनिक संकेतक

1. सामान्य नैदानिक ​​मानदंड

2. मूत्र की विशेष जांच

आमाशय रस

2. फॉस्फेट बफर (0.1 मीटर, पीएच 5.8-8.0)

3. ट्रिस बफर (0.1 मीटर, पीएच 7.1-9.2)

4. एसीटेट बफर (0.2 मीटर, पीएच 3.6-5.8)

5. ग्लाइसिन बफर (0.05 मीटर, पीएच 8.6-10.6)

3. कुछ अभिकर्मकों की तैयारी

विषयसूची

2. फॉस्फेट बफर (0.1 मीटर, पीएच 5.8-8.0)

ना 2 एचपीओ 4 0.2 एम, एमएल	ना 2 एच 2 पीओ 4 0.2 एम, एमएल

3. ट्रिस बफर (0.1 मीटर, पीएच 7.1-9.2)

24.2 ग्राम ट्रिस-(हाइड्रॉक्सीमेथाइल) एमिनोमीथेन को 1 एल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क (एच 2 ओ के 500 मिलीलीटर में) में भंग कर दिया जाता है। आवश्यक पीएच मान प्राप्त करने के लिए, तालिका में इंगित 1 एम एचसीएल की मात्रा को जोड़ा जाता है और मात्रा को आसुत जल के साथ 1000 मिलीलीटर तक समायोजित किया जाता है।

4. एसीटेट बफर (0.2 मीटर, पीएच 3.6-5.8)

सोडियम एसीटेट 0.2 एम, एमएल	एसिटिक एसिड 0.2 एम, एमएल		सोडियम एसीटेट 0.2 एम, एमएल	एसिटिक एसिड 0.2 एम, एमएल

5. ग्लाइसिन बफर (0.05 मीटर, पीएच 8.6-10.6)

ग्लाइसीन और सोडियम हाइड्रॉक्साइड की संकेतित मात्रा मिश्रित होती है और मात्रा को आसुत जल से 200 मिलीलीटर तक समायोजित किया जाता है।

	ग्लाइसिन 0.2 एम, एमएल	NaOH 0.2 एम, एमएल		ग्लाइसिन 0.2 एम, एमएल	NaOH 0.2 एम, एमएल

3. कुछ अभिकर्मकों की तैयारी

सक्रिय समाधान. 155 मिलीग्राम कम ग्लूटाथियोन और 400 मिलीग्राम क्रिस्टलीय एल्ब्यूमिन को 100 मिलीलीटर वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में रखा जाता है, 50 मिलीलीटर आसुत जल में भंग कर दिया जाता है, और पीएच को 1 एम NaOH समाधान का उपयोग करके 8.2 तक समायोजित किया जाता है। फिर निशान पर पानी डालें।

सिल्वर नाइट्रेट का अमोनिया विलयन. चांदी के 2-3% घोल में अमोनिया का एक सांद्र विलयन तब तक मिलाया जाता है जब तक कि अवक्षेप घुल न जाए।

एसीटेट बफर पीएच 3.6. 463 मिली घोल ए और 37 मिली घोल बी मिलाकर तैयार करें, 1 लीटर के वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में पानी के साथ निशान तक पतला करें। समाधान ए: 1 लीटर वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में पानी के साथ 11.55 मिलीलीटर ग्लेशियल एसिटिक एसिड पतला करें। समाधान बी: ​​1 लीटर फ्लास्क में 27.2 ग्राम सोडियम एसीटेट पानी में घोलें।

ब्यूरेट अभिकर्मक (बेनेडिक्ट अभिकर्मक). पानी के स्नान में 300 मिलीलीटर आसुत जल में 173 ग्राम सोडियम साइट्रेट और 100 ग्राम सोडियम कार्बोनेट घोला जाता है। अलग से, 17.3 ग्राम कॉपर सल्फेट को 300 मिलीलीटर पानी में घोल दिया जाता है। दोनों घोलों को सूखा दिया जाता है और कुल मात्रा को 1 लीटर तक लाया जाता है।

उभयरोधी घोल. 2.76 ग्राम वेरोनल और 2.06 ग्राम मेडिनल 1 लीटर आसुत जल में घुल जाते हैं। रेफ्रिजरेटर में स्टोर करें; यदि एक अवक्षेप दिखाई देता है, तो समाधान उपयोग के लिए उपयुक्त नहीं है।

कोयले का निलंबन. 0.25 ग्राम सक्रिय चारकोल को 100 मिलीलीटर वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में रखा जाता है और एसीटेट बफर पीएच 3.6 से पतला होता है। इस्तेमाल से पहले अच्छी तरह हिलायें।

अभिकर्मक को कम करना. 0.016% कॉपर सल्फेट के घोल से तैयार एस्कॉर्बिक एसिड का 1% घोल।

हीमोग्लोबिन, एसीटेट बफर में 4% समाधान (पीएच 4.0). सबसे पहले, 8 मोल/लीटर यूरिया घोल में 8% हीमोग्लोबिन घोल तैयार किया जाता है, जिसे 60 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टैट में 2 घंटे के लिए रखा जाता है, और उपयोग करने से पहले एसीटेट बफर के साथ 2 बार पतला किया जाता है।

ग्लाइसील-ग्लाइसिन. 0.55 एमएमओएल/लीटर, पीएच 8.3। 3.63 ग्राम ग्लाइसील-ग्लाइसिन को 50 मिली के वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में रखा जाता है, जो पानी के साथ निशान (बफर घोल) के ऊपर होता है।

विकृतीकरण समाधान

बिलीरुबिन के निर्धारण के लिए डायज़ो अभिकर्मक. दो समाधान तैयार करें। पहला समाधान: 500 मिलीलीटर आसुत जल में 3 ग्राम सल्फानिलिक एसिड भंग कर दिया जाता है, 15 मिलीलीटर केंद्रित हाइड्रोक्लोरिक एसिड (गर्म स्नान में) जोड़ा जाता है, मात्रा को पानी के साथ 1 लीटर तक समायोजित किया जाता है। दूसरा समाधान: 0.5% जलीय सोडियम नाइट्राइट समाधान। उपयोग करने से पहले, पहले घोल का 5 मिली और दूसरे का 0.25 मिली मिलाएं।

डायसेटाइल, कार्यशील समाधान. 100 मिलीलीटर वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क (समाधान को रेफ्रिजरेटर में संग्रहीत किया जाता है) में आसुत जल के साथ 1 मिलीलीटर डायसेटाइल को पतला किया जाता है। डायसेटाइल के स्टॉक समाधान के 1 मिलीलीटर में 24 मिलीलीटर आसुत जल मिलाकर उपयोग करने से पहले डायसेटाइल का कार्यशील घोल तैयार किया जाता है।

डिपेनिलमाइन अभिकर्मक. 1 ग्राम डिपेनिलमाइन को 100 मिली ग्लेशियल एसिटिक एसिड में घोल दिया जाता है। घोल में 2.75 मिली सांद्र सल्फ्यूरिक एसिड मिलाया जाता है।

अंशांकन समाधान. बेसिक - 0.75 mmol/l ALA (100 µg/ml) बेस के संदर्भ में: ALA हाइड्रोक्लोराइड का 0.00635 g एसीटेट बफर pH 3.6 में 50 मिली वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में घोला जाता है। रेफ्रिजरेटर में एक महीने से अधिक समय तक स्टोर न करें। मुख्य समाधान, 1 μg / ml से एक कार्यशील अंशांकन समाधान तैयार किया जाता है। एसिटेट बफर के साथ स्टॉक समाधान को 100 बार पतला करके उपयोग करने से पहले तैयार करें ।

अंशांकन समाधान. 22.5 मिलीग्राम डायहाइड्रोक्सीसिटोन को 25 मिलीलीटर पानी में गर्म करने के साथ घोल दिया जाता है। इस घोल के 1 मिली में डायहाइड्रॉक्सीएसीटोन के 10 μmol होते हैं। डाइहाइड्रॉक्सीएसीटोन का एक अंशांकन समाधान कई टेस्ट ट्यूब (काम देखें) में डाला जाता है, आवश्यक मात्रा में सबसे ऊपर होता है, और फिर प्रतिक्रिया उसी तरह से की जाती है जैसे एंजाइम की गतिविधि को निर्धारित करने में।

लोहे का अंशांकन (मानक) समाधान (30 µmol/l).

सबसे पहले मोरा साल्ट तैयार किया जाता है.

कैफीन अभिकर्मक. शुद्ध कैफीन का 1 ग्राम, सोडियम बेंजोएट का 7.5 ग्राम, सोडियम एसीटेट का 12.5 ग्राम आसुत जल के 90 मिलीलीटर में भंग कर दिया जाता है, 50-60 डिग्री सेल्सियस तक गरम किया जाता है, हिलाया जाता है, ठंडा किया जाता है और आसुत जल के साथ 100 मिलीलीटर तक बनाया जाता है।

नाइट्रिक एसिड में अमोनियम मोलिब्डेट. 7.5 ग्राम अमोनियम मोलिब्डेट को 100 मिली पानी में घोल दिया जाता है और 100 मिली 32% नाइट्रिक एसिड मिलाया जाता है।

अल्काप्टनुरिया के लिए मूत्र. पैथोलॉजिकल की अनुपस्थिति में, हाइड्रोक्विनोन को सामान्य मूत्र में 20 ग्राम / लीटर की दर से जोड़ा जाता है।

हाइपरएमिनोएसिडुरिया के साथ मूत्र. पैथोलॉजिकल ग्लाइसिन की अनुपस्थिति में सामान्य मूत्र में 1.0 ग्राम / लीटर की दर से जोड़ा जाता है।

म्यूकोपॉलीसेकेराइडोसिस के साथ मूत्र. पैथोलॉजिकल की अनुपस्थिति में, सामान्य मूत्र में 0.05-0.1 g / l की दर से चोंसुराइड या हेपरिन मिलाया जाता है।

पेंटोसुरिया के साथ मूत्र. पैथोलॉजिकल की अनुपस्थिति में, xylulose या राइबोज को मूत्र में 1.0 g/l की दर से जोड़ा जाता है।

टायरोसिनोसिस के साथ मूत्र. पैथोलॉजिकल की अनुपस्थिति में, सामान्य मूत्र में 0.4-0.5 g / l की दर से टायरोसिन मिलाया जाता है।

फ्रुक्टोसुरिया के साथ मूत्र. पैथोलॉजिकल की अनुपस्थिति में, फ्रुक्टोज को सामान्य मूत्र में 0.3-0.4 ग्राम / लीटर की दर से जोड़ा जाता है।

सिस्टिनुरिया के लिए मूत्र. पैथोलॉजिकल सिस्टीन की अनुपस्थिति में, सामान्य मूत्र में 0.4-0.5 ग्राम / लीटर की दर से जोड़ा जाता है।

सोडियम एसीटेट 3-जलीय, संतृप्त घोल. 375 ग्राम सोडियम एसीटेट 3-जलीय (या 226 ग्राम निर्जल नमक) 250 मिलीलीटर गर्म पानी में घोलकर कमरे के तापमान पर ठंडा किया जाता है। कमरे के तापमान पर रखो। घोल रंगहीन और पारदर्शी होना चाहिए।

सोडियम फॉस्फेट 0.25 mol/l विस्थापित। 200 मिलीलीटर फ्लास्क में 9.7 ग्राम Na 2 HPO 4 ∙12H 2 O या 18 g Na 2 HPO 4 12H 2 O को पानी में घोलकर तैयार करें। इस घोल के 2 मिली को 1 मिली ट्राइक्लोरोएसेटिक एसिड घोल में मिलाते समय, पीएच 5.0-6.0 की सीमा में होना चाहिए।

क्रिएटिनिन बेसिक कैलिब्रेशन सॉल्यूशन, 10 mmol/l. 113.1 मिलीग्राम क्रिएटिनिन को 0.1 mol/l हाइड्रोक्लोरिक एसिड समाधान के साथ 100 मिलीलीटर में समायोजित किया जाता है। अंशांकन ग्राफ का निर्माण करते समय, स्टॉक समाधान को पानी से 100 बार पतला करके स्टॉक समाधान से एक कार्यशील समाधान तैयार किया जाता है, समाधान के 1 मिलीलीटर में 0.1 मिमी क्रिएटिनिन होता है। इसके आधार पर, क्रिएटिन की संगत सांद्रता के साथ कई टेस्ट ट्यूब प्राप्त किए जाते हैं।

थायमिन के निर्धारण के लिए ऑक्सीकरण मिश्रण. 1% पोटेशियम हेक्सासायनोफेरेट (III) के 8 मिलीलीटर में 30% NaOH समाधान का 20 मिलीलीटर जोड़ा जाता है, अच्छी तरह मिलाएं। उपयोग करने से पहले तैयार करें।

ओरसीन अभिकर्मक. 1 ग्राम ऑर्सिन में 500 मिलीलीटर 30% हाइड्रोक्लोरिक एसिड (घनत्व 1.15 ग्राम / सेमी 3) मिलाएं। घुलने तक हिलाएं और 10% आयरन क्लोराइड घोल (III) FeCl 3 का 4-5 मिलीलीटर डालें। अभिकर्मक को कसकर बंद अंधेरे बोतल में संग्रहित किया जाता है।

पी-नाइट्रोएनिलिन बुनियादी अंशांकन समाधान. 0.0829 ग्राम p-nitroaniline को 100 मिली वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में रखा जाता है, जो पानी के साथ निशान तक बना होता है और घुल जाता है।

अवक्षेपण समाधान. 1 लीटर आसुत जल में 561 ग्राम अमोनियम सल्फेट घोलें और 24 घंटे बाद छान लें।

बेसिक फॉस्फेट बफर सॉल्यूशन और इसके वर्किंग सॉल्यूशंस नंबर 1-4. 500 मिलीलीटर की क्षमता वाले वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में 400 मिलीलीटर पानी में 33.5 ग्राम NaOH घोलें और 226.8 ग्राम KH 2 PO 4 डालें, पूरी तरह से घुलने तक हिलाएं, ठंडा करें और निशान पर पानी डालें। बुनियादी फॉस्फेट बफर के कार्यशील समाधान तैयार करने के लिए, मूल फॉस्फेट बफर (एमएल में) के निम्नलिखित संस्करणों को 100 मिलीलीटर की क्षमता वाले वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में मापा जाता है: नंबर 1 - 92.51; नंबर 2 - 74.91; नंबर 3 - 59.18 और नंबर 4 - 48.68, जिसके बाद उनकी सामग्री को पानी से निशान पर लाया जाता है।

पिक्रिक एसिड, संतृप्त घोल. कमोडिटी पिक्रिक एसिड में 15-20% नमी होती है, एसिड को सुखाएं नहीं। विस्फोटक! गर्म स्नान में 2 ग्राम पिक्रिक एसिड को 100 मिलीलीटर पानी में घोलें। उसके बाद, घोल को बीच-बीच में हिलाते हुए 24 घंटे के लिए छोड़ दिया जाता है। फिर घोल को छान लिया जाता है। समाधान स्थिर है और एक अंधेरे कांच के कंटेनर में संग्रहित है।

पाइरोफॉस्फेट बफर 0.05 एम पीएच 8.2. 4.46 ग्राम सोडियम पाइरोफॉस्फेट को 200 मिलीलीटर वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में स्थानांतरित करें, इसे लगभग 100 मिलीलीटर पानी में घोलें, पीएच को 0.1 एम एचसीएल समाधान के साथ 8.2 पर समायोजित करें और आसुत जल को निशान में जोड़ें।

पाइरोफॉस्फेट बफर 0.1 एम पीएच 8.5. 4.46 ग्राम सोडियम पाइरोफॉस्फेट को 100 मिलीलीटर की क्षमता वाले वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में स्थानांतरित करें, इसे 50 मिलीलीटर पानी में घोलें, पीएच को 0.1 एम एचसीएल समाधान के साथ 8.5 में समायोजित करें और आसुत जल को निशान में जोड़ें।

काम कर रहे अभिकर्मक. निर्धारण के दिन 0.3 N सोडियम हाइड्रॉक्साइड के 30 भाग मिलाकर तैयार करें। 2 भाग 0.5% फिनोलफथेलिन घोल और 1 भाग 0.12% कॉपर सल्फेट घोल।

एसीटोन साइनोहाइड्रिन समाधान. 1 लीटर आसुत जल में एसीटोन साइनोहाइड्रिन का 1 ampoule (रक्त में हीमोग्लोबिन के निर्धारण के लिए किट से 0.5 मिली - 0.47 ग्राम) घोलें।

फेरियासीटोन सायनोहाइड्रिन घोल. 1 लीटर आसुत जल में 200 मिलीग्राम पोटेशियम फेरिकैनाइड और 1 ampoule (0.5 मिली - 0.47 ग्राम) एसीटोन साइनोहाइड्रिन घोलें: रक्त हीमोग्लोबिन का निर्धारण करने के लिए एक परिवर्तनकारी समाधान तैयार करने के लिए अभिकर्मकों के एक सेट से उपयोग करना संभव है। कमरे के तापमान पर एक अंधेरे कांच के कंटेनर में संग्रहीत होने पर कई महीनों तक स्थिर।

ग्लूऑक्सीडेज घोल. लगभग 300 इकाइयां शामिल हैं। 1 मिलीग्राम में। सूखी तैयारी की उचित मात्रा को 10 मिली पानी में घोलकर तैयार करें।

सल्फोनेटेड बाटो-फेनेंथ्रोलाइन का एक समाधान. एक परखनली में, 0.5 मिली क्लोरोसल्फोनिक एसिड 100 मिलीग्राम बाथोफेनेंथ्रोलाइन में मिलाया जाता है, 30 सेकंड के लिए उबलते पानी के स्नान में गरम किया जाता है, ठंडा किया जाता है और 10 मिलीलीटर बिडिस्टिल पानी धीरे-धीरे जोड़ा जाता है, 5 मिनट के लिए पानी के स्नान में फिर से गरम किया जाता है। मिश्रण को 200 मिलीलीटर फ्लास्क में स्थानांतरित किया जाता है, 100 मिलीलीटर पानी जोड़ा जाता है, समाधान का पीएच 4-5 एन NaOH में समायोजित किया जाता है, और पानी 200 मिलीलीटर की मात्रा में जोड़ा जाता है।

पोटेशियम आयोडाइड में आयोडीन का घोल (लुगोल का घोल). 100 मिलीलीटर आसुत जल में 20 ग्राम पोटेशियम आयोडाइड और 10 ग्राम आयोडीन घोलें। उपयोग करने से पहले, समाधान 5 बार पतला होता है।

p-nitrosodimethylaniline (NDMA) का घोल. व्यावसायिक रूप से उपलब्ध एनडीएमए तैयारी को एथिल ईथर से पुनः क्रिस्टलीकृत किया जाता है। अल्कोहल डिहाइड्रोजनेज को मापने के लिए, एनडीएमए का 1 मिलीग्राम 0.1 एम पाइरोफॉस्फेट बफर (पीएच 8.5) के 100 मिलीलीटर में भंग कर दिया जाता है। परिणामी घोल को एक पेपर फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है और छानना एक ही बफर के साथ 2 बार पतला होता है। दो महीने के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।

इल्का का अभिकर्मक. एसिटिक एनहाइड्राइड के 5 भागों (मात्रा के अनुसार) में, 1 भाग ग्लेशियल एसिटिक एसिड मिलाएं, फिर धीरे-धीरे 1 भाग केंद्रित सल्फ्यूरिक एसिड डालें। अभिकर्मक को ठंड में स्टोर करें!

मिलन अभिकर्मक. (दबाव में तैयार! ) 40 ग्राम पारा 57 मिलीलीटर केंद्रित नाइट्रिक एसिड में पहले ठंड में घुल जाता है, और फिर पानी के स्नान में गरम किया जाता है। परिणामी घोल को 2 मात्रा में पानी से पतला किया जाता है, जिसे तलछट से जमने और निकालने की अनुमति दी जाती है। एक गहरे रंग की कांच की बोतल में स्टोर करें।

अमोनियम मोलिब्डेट अभिकर्मक. अमोनियम मोलिब्डेट के 2.5 ग्राम को 60 मिलीलीटर आसुत जल में घोलकर छान लिया जाता है। समाधान को 100 मिलीलीटर फ्लास्क में जोड़ा जाता है। एक अन्य फ्लास्क में, 25 मिली आसुत जल में 7.5 मिली सांद्र सल्फ्यूरिक एसिड मिलाया जाता है। दूसरा घोल पहले में मिलाया जाता है, ठंडा किया जाता है और आसुत जल से पतला किया जाता है। समाधान एक महीने के लिए उपयुक्त है।

अभिकर्मक "नाडी". डाइमिथाइल-पी-फेनिलेनेडियम के 1% घोल को अल्कोहल में α-नैफ्थॉल के 1% घोल और 1.5% सोडियम कार्बोनेट घोल के बराबर मात्रा में मिलाया जाता है। घोल का रंग गहरा भूरा है और इसमें गुलाबी रंग नहीं होना चाहिए। कक्षा से 1 घंटे पहले तैयार किया गया।

अभिकर्मक नशा. अमोनियम एसीटेट के 15.4 ग्राम, ग्लेशियल एसिटिक एसिड के 0.3 ग्राम और एसिटाइलैसिटोन के 0.2 ग्राम को 100 मिलीलीटर की क्षमता के साथ एक फ्लास्क में जोड़ा जाता है, आसुत जल में भंग कर दिया जाता है और मात्रा को निशान के लिए समायोजित किया जाता है।

नेस्लर का अभिकर्मक. 500 मिलीलीटर की क्षमता वाले वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में, 150 ग्राम पोटेशियम आयोडाइड, 110 ग्राम आयोडीन, 100 मिलीलीटर आसुत जल और लगभग 140-150 ग्राम धात्विक पारा मिलाया जाता है और 15 मिनट के लिए जोर से हिलाया जाता है। इस मामले में, समाधान अनायास गर्म हो जाता है, और भंग आयोडीन के कारण रंग धीरे-धीरे पीला हो जाता है। फिर मिश्रण को बहते पानी के नीचे तब तक ठंडा किया जाता है जब तक कि एक अलग लाल रंग नहीं बना रहता है, जिसके बाद सामग्री को तब तक हिलाया जाता है जब तक कि लाल रंग हरा न हो जाए। सफाई के बाद पारा अवक्षेप को पानी से अच्छी तरह धो लें। घोल और धुलाई को मिलाएं, उन्हें पानी से 2 लीटर तक पतला करें। परिणामी घोल के 75 मिली को 0.5 लीटर वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में 75 मिली पानी और 350 मिली 10% सोडियम हाइड्रॉक्साइड घोल में लें और पानी के साथ निशान तक पतला करें।

फेलिंग का अभिकर्मक. दो समाधान अलग से तैयार किए जाते हैं। समाधान 1: 200 ग्राम रोशेल नमक और 150 ग्राम NaOH को 1 लीटर वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में घोलें और पानी के साथ निशान तक पतला करें। समाधान 2: 1 लीटर की क्षमता वाले वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में, 40 ग्राम कॉपर (II) सल्फेट को पानी में घोलें और पानी के साथ निशान तक पतला करें। उपयोग करने से पहले इन घोलों को बराबर मात्रा में मिला लें।

फोलिन का अभिकर्मक. 1 लीटर फ्लास्क में, 750 मिली पानी में 1 ग्राम सोडियम टंगस्टेट और 20 ग्राम फॉस्फोमोलिब्डिक एसिड घोलें। एक भाटा कंडेनसर के साथ एक डाट के साथ फ्लास्क को बंद करें और, रेफ्रिजरेटर में पानी के प्रवाह को चालू करते हुए, सामग्री को 10 घंटे तक उबाला जाता है; फिर इसे ठंडा किया जाता है, एक वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में डाला जाता है और अभिकर्मक की जलीय मात्रा को 1 लीटर तक समायोजित किया जाता है।

एर्लिच का अभिकर्मक. p-dimethylaminobenzaldehyde के 0.7 ग्राम को 150 मिली केंद्रित हाइड्रोक्लोरिक एसिड में घोलकर 100 मिली पानी में मिलाया जाता है। घोल रंगहीन या थोड़ा पीला होना चाहिए। एक गहरे रंग के कांच के कंटेनर में स्टोर करें। अभिकर्मक स्थिर है।

एर्लिच का अभिकर्मक. 35 मिली ग्लेशियल एसिटिक एसिड में 50 मिली वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में 1 ग्राम पी-डाइमिथाइलैमिनोबेंज़ल्डिहाइड घोलें, 8 मिली 57% परक्लोरिक एसिड मिलाएं और ग्लेशियल एसिटिक एसिड के साथ निशान बनाएं। एक अंधेरे कांच के कंटेनर में रेफ्रिजरेटर में एक सप्ताह तक स्टोर करें।

थाइमोल अल्कोहल समाधान (10%). शुद्ध थाइमोल के 10 ग्राम 96˚ एथिल अल्कोहल के 100 मिलीलीटर में घुल जाते हैं। शुद्ध थाइमोल प्राप्त करना निम्नानुसार किया जाता है। 100 ग्राम थाइमोल को 96˚ एथिल अल्कोहल के 100 मिली में घोलकर छान लिया जाता है। छानने में 1 लीटर ठंडा आसुत जल डालें, जोर से हिलाएं और 20 मिनट तक खड़े रहने दें। फ़िल्टर को फ़िल्टर किया जाता है और फ़िल्टर पर शेष क्रिस्टल को ठंडे आसुत जल से दो बार धोया जाता है। पहले फिल्टर पेपर पर सुखाएं, फिर 2-3 दिनों के लिए निर्जल कैल्शियम क्लोराइड के ऊपर डेसिकेटर में स्थिर वजन तक रखें।

मानक समाधान. एक मानक घोल की तैयारी दो घोलों को मिलाकर की जाती है: 1) बेरियम क्लोराइड का 0.0962 n घोल: 1.175 ग्राम क्रिस्टलीय BaCl 2 2H 2 O एक वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में 100 मिलीलीटर पानी में घोला जाता है। 2) 0.2 एन सल्फ्यूरिक एसिड समाधान। अगला, बेरियम सल्फेट का निलंबन प्राप्त किया जाता है: बेरियम क्लोराइड के 0.0962 एन समाधान के 3 मिलीलीटर को 100 मिलीलीटर वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में डाला जाता है और मात्रा को 0.2 एन में सल्फ्यूरिक एसिड के समाधान के साथ + 10 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर समायोजित किया जाता है। (इस तापमान पर, अवक्षेपित बेरियम सल्फेट के कण आकार अपेक्षाकृत स्थिर परिणाम देते हैं)।

सब्सट्रेट बफर समाधान: एक परखनली में 10 मिली पानी डालें और 0.028 ग्राम L-glutamyl-p-nitroaniline और 0.082 g सोडियम क्लोराइड डालें और बिना हिलाए, परखनली की सामग्री को 60 सेकंड के लिए उबलते पानी के स्नान में घोलें . फिर घोल को 37 ° C तक ठंडा किया जाता है और 2.5 मिली बफर घोल मिलाया जाता है। तैयार सब्सट्रेट समाधान को ऑपरेशन के दौरान 37 डिग्री सेल्सियस पर पानी के स्नान में संग्रहित किया जाता है। अप्रयुक्त सब्सट्रेट समाधान रेफ्रिजरेटर में एक सप्ताह तक संग्रहीत किया जा सकता है। सब्सट्रेट खराब घुलनशील है और कमरे के तापमान पर अवक्षेपित होता है। इसलिए, उपयोग करने से पहले, क्रिस्टलीकृत सब्सट्रेट को उबलते पानी के स्नान में गर्म करके भंग कर दिया जाता है। सब्सट्रेट के ताप और विघटन को दो बार से अधिक नहीं दोहराया जा सकता है।

एएलटी के निर्धारण के लिए सब्सट्रेट समाधान (समाधान संख्या 1). 29.2 मिलीग्राम α-ketoglutaric एसिड और 1.78 ग्राम alanine (0.89 g of α-alanine) के नमूनों को एक विश्लेषणात्मक संतुलन पर तौला जाता है और 1 M सोडियम हाइड्रॉक्साइड घोल में तब तक घोला जाता है जब तक कि अवक्षेप पूरी तरह से भंग न हो जाए (pH 7.4)। समाधान को 100 मिलीलीटर फ्लास्क में डाला जाता है और मात्रा को 0.1 एम फॉस्फेट बफर (पीएच 7.4) के साथ निशान में समायोजित किया जाता है। क्लोरोफॉर्म की 1 बूंद डालें। समाधान एक रेफ्रिजरेटर में जमे हुए संग्रहीत किया जाता है।

एएसएटी के निर्धारण के लिए सब्सट्रेट समाधान (समाधान संख्या 2). 29.2 मिलीग्राम α-ketoglutaric एसिड और 2.66 ग्राम α-aspartic एसिड (α-aspartic एसिड के 1.33 ग्राम) के नमूने एक विश्लेषणात्मक संतुलन पर तौले जाते हैं। अगला, समाधान उसी तरह तैयार किया जाता है जैसे समाधान संख्या 1।

ग्लूकोज फॉस्फेट आइसोमेरेज़ के निर्धारण के लिए सब्सट्रेट समाधान. मेडिनल एसीटेट बफर सॉल्यूशन पीएच 7.4 तैयार किया जाता है (9.714 ग्राम सोडियम एसीटेट और 14.714 ग्राम मेडिनल पानी में घुल जाता है और मात्रा 500 मिलीलीटर तक समायोजित हो जाती है)। 25 मिलीलीटर औसत दर्जे का एसीटेट बफर के साथ ग्लूकोज-6-फॉस्फेट के सोडियम नमक के 0.03 एम समाधान के 8.33 मिलीलीटर मिलाएं; मिश्रण में 0.1 एम हाइड्रोक्लोरिक एसिड समाधान के 25 मिलीलीटर जोड़ें और पानी के साथ 100 मिलीलीटर पतला करें। ठंडा रखें।

लैक्टेट डिहाइड्रोजनेज के निर्धारण के लिए सब्सट्रेट समाधान. 1 एम सोडियम लैक्टेट समाधान, 9 एम NaCl समाधान, 0.05 एम सीएल 2, 10 ग्राम/एल एनएडी समाधान के 1 मिलीलीटर मिलाएं। 0.5 एम फॉस्फेट बफर समाधान (पीएच 7.4) के 2.5 मिलीलीटर और नाइट्रोटेट्राजोलियम नीले समाधान के 1 ग्राम / लीटर सामग्री में जोड़े जाते हैं। उपयोग करने से पहले, मिश्रण में 1 ग्राम / एल की एकाग्रता के साथ फेनेंज़िन मेथासल्फेट के 0.25 मिलीलीटर घोल को मिलाया जाता है।

फ्रुक्टोज बिस्फोस्फेट एल्डोलेस के निर्धारण के लिए सब्सट्रेट समाधान. फ्रुक्टोज बिस्फोस्फेट के बेरियम नमक के 270 मिलीग्राम 1 एम हाइड्रोक्लोरिक एसिड के 3.5 मिलीलीटर में भंग कर दिए जाते हैं। 14% सोडियम सल्फेट घोल में 1 मिली मिलाया जाता है और बनने वाले अवक्षेप को सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा हटा दिया जाता है। सतह पर तैरनेवाला में सोडियम सल्फेट की 1 बूंद डालें। मैलापन की उपस्थिति बेरियम आयनों के अपर्याप्त पूर्ण जमाव को इंगित करती है। इस मामले में, अधिक सोडियम सल्फेट जोड़ा जाता है और फिर से सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। सेंट्रीफ्यूगेट को पीएच 7.4-7.6 के लिए 3% सोडियम हाइड्रॉक्साइड समाधान के साथ समायोजित किया जाता है, 25 मिलीलीटर फ्लास्क में स्थानांतरित किया जाता है और मात्रा को निशान में समायोजित किया जाता है। परिणामी समाधान को हाइड्राज़िन क्लोराइड के 0.56 एम समाधान के 25 मिलीलीटर, मोनोआयोडोएसेटिक एसिड के 0.002 एम समाधान के 25 मिलीलीटर, 0.5% सोडियम कार्बोनेट समाधान के 100 मिलीलीटर और आसुत जल के 25 मिलीलीटर के साथ मिश्रित किया जाता है। रेफ्रिजरेटर में संग्रहीत।

थाइमोल-वेरोनल बफर. एक 100 मिलीलीटर वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में, बफर समाधान के 80 मिलीलीटर और थाइमोल के 10% अल्कोहल समाधान के 1 मिलीलीटर मिलाएं, हिलाएं और बफर समाधान को निशान पर जोड़ें। पीएच मान 7.55 होना चाहिए।

ओ-टोलुइडिन अभिकर्मक. 0.15 ग्राम थायोरिया को 94 मिली ग्लेशियल एसिटिक एसिड में घोलकर 6 मिली डिस्टिल्ड ओ-टोल्यूडीन के साथ मिलाया जाता है। एक अंधेरे बोतल में संग्रहित।

पानी से संतृप्त फिनोल. 100 ग्राम डिस्टिल्ड फिनोल में 35 मिली पानी मिलाया जाता है और फिनोल के विघटन को तेज करने के लिए मिश्रण को थोड़ा गर्म किया जाता है।

फेनोल्फथलीन, कार्यशील समाधान. 0.1 एन सोडियम हाइड्रॉक्साइड घोल के 15 मिली में 75 मिलीग्राम पदार्थ घोलकर तैयार करें, घोल रंगहीन या थोड़ा गुलाबी होना चाहिए, रंगीन घोल काम के लिए उपयुक्त नहीं हैं। अभिकर्मक के प्रतिरोध को बढ़ाने के लिए, इसमें 3 मिलीग्राम ट्रिलन मिलाया जाता है, जो भारी धातुओं के लवणों को बांधकर, वायुमंडलीय ऑक्सीजन द्वारा फिनोलफथेलिन के ऑटोऑक्सीडेशन को रोकता है।

जमने योग्य वसा. एक सफेद थक्का बनने तक गोजातीय रक्त फाइब्रिन को बहते पानी में रक्त वर्णक से कई दिनों तक धोया जाता है। पानी निचोड़ा जाता है, और ग्लिसरीन से भरे हुए फाइब्रिन को कसकर बंद जार में जमा किया जाता है। उपयोग करने से पहले, फाइब्रिन को ग्लिसरीन से धोया जाता है।

फास्फोरस-वैनिलिन अभिकर्मक. सांद्र फॉस्फोरिक एसिड के 4 भाग (मात्रा के अनुसार) वैनिलिन के 0.6% जलीय घोल के 1 भाग के साथ मिलाया जाता है। अभिकर्मक को कमरे के तापमान पर एक गहरे रंग के कांच के कंटेनर में संग्रहित किया जाता है।

फ्रुक्टोज 1,6-बिस्फोस्फेट, सोडियम नमक. फ्रुक्टोज-1,6-बिस्फोस्फेट के सोडियम नमक के 10% घोल के 2.0 मिली को 25 मिली फ्लास्क में पानी के साथ निशान तक पतला किया जाता है। रेफ्रिजरेटर में संग्रहीत होने पर स्थिर।

यूरिया के लिए रंग अभिकर्मक. डायसेटाइल मोनोऑक्ज़ाइम और थायोसेमीकार्बाज़ाइड युक्त यूरिया के निर्धारण के लिए किट से टैबलेट को 50 मिलीलीटर फ्लास्क में गर्म करके भंग कर दिया जाता है। समाधान तीन सप्ताह के लिए स्थिर है। उपयोग करने से पहले, तैयार घोल की समान मात्रा और 9.6% सल्फ्यूरिक एसिड घोल मिलाएं।

β-ग्लिसरोफॉस्फेट का क्षारीय घोल. 100 मिलीलीटर की क्षमता वाले वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में 1 ग्राम सोडियम β-ग्लिसरोफॉस्फेट और 0.85 ग्राम मेडिनल मिलाएं, लगभग 30 मिलीलीटर आसुत जल डालें, घोलें और पानी के साथ मात्रा को निशान पर लाएं। 100 मिलीलीटर की क्षमता वाले एक अन्य वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में, β-ग्लिसरोफॉस्फेट के तैयार समाधान के 50 मिलीलीटर, 0.1 एम सोडियम हाइड्रॉक्साइड समाधान के 2.8 मिलीलीटर जोड़ें और आसुत जल (समाधान पीएच 8.6) के साथ निशान पर लाएं। तरल पर लगभग 3 मिलीलीटर टोल्यूनि डालें। रेफ्रिजरेटर में समाधान को 10 दिनों से अधिक समय तक स्टोर न करें।

पीबीएस (फॉस्फेट बफर खारा) आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला इम्यूनोहिस्टोकेमिकल धुंधला बफर है और आमतौर पर जैविक अनुसंधान में उपयोग किया जाता है। ऑस्मोलैरिटी और समाधानों के आयनों की सांद्रता मानव शरीर (आइसोटोनिक) की एकाग्रता से मेल खाती है।

पीबीएस एक जलीय घोल है जिसमें सोडियम हाइड्रोजन फॉस्फेट, सोडियम क्लोराइड और कुछ मामलों में पोटेशियम क्लोराइड और पोटेशियम डाइहाइड्रोजन फॉस्फेट होता है।

IHC के लिए इम्यूनोफ्लोरेसेंट धुंधला हो जाना

इम्यूनोफ्लोरेसेंट धुंधला इम्यूनोहिस्टोकेमिकल (IHC) धुंधला होने की पहली विधि थी। प्रतिजन-एंटीबॉडी बाध्यकारी प्रतिक्रिया के आधार के साथ, प्रतिजनों के संयुग्मित होने पर प्रतिजन फ्लोरोसेंट रंगों का उपयोग करके दिखाई देते हैं। एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के तहत एक निश्चित तरंग दैर्ध्य के उत्तेजना प्रकाश द्वारा सक्रिय होने पर प्रक्रिया होती है। इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री एक ऊतक खंड की कोशिकाओं में एंटीजन (जैसे प्रोटीन) का पता लगाने की प्रक्रिया को संदर्भित करता है जो विशेष रूप से जैविक ऊतकों में एंटीजन के लिए बाध्यकारी एंटीबॉडी के सिद्धांत का उपयोग करता है।

फॉस्फेट बफर खारा (पीबीएस) का उपयोग करना

फॉस्फेट बफर खारा के कई उपयोग हैं क्योंकि यह अधिकांश कोशिकाओं के लिए आइसोटोनिक और गैर विषैले है। इसका उपयोग पदार्थों को पतला करने के लिए किया जा सकता है और कोशिकाओं वाले कंटेनरों को धोने के लिए उपयोग किया जाता है। पीबीएस को बायोमोलेक्यूल सुखाने के तरीकों में एक मंदक के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है, क्योंकि इसके भीतर पानी के अणुओं को एक पदार्थ (जैसे प्रोटीन) के चारों ओर "सूखे" और एक ठोस सतह पर स्थिर करने के लिए संरचित किया जाएगा।

पानी की पतली फिल्म जो पदार्थ को बांधती है, विकृतीकरण या अन्य गठनात्मक परिवर्तनों को रोकती है। कार्बोनेट बफ़र्स का उपयोग उसी उद्देश्य के लिए किया जा सकता है, लेकिन कम दक्षता के साथ। पीबीएस का उपयोग इलिप्सोमेट्री में प्रोटीन सोखना को मापने के दौरान एक संदर्भ स्पेक्ट्रम प्रदान करने के लिए भी किया जा सकता है।

पीबीएस की तैयारी

पीबीएस तैयार करने के कई अलग-अलग तरीके हैं।

कुछ सूत्रों में पोटेशियम नहीं होता है, जबकि अन्य में कैल्शियम या मैग्नीशियम होता है। नीचे बफर नुस्खा, जो अपेक्षाकृत सरल है, पीबीएस (0.1 एम) के 10X स्टॉक समाधान के लिए है। ट्वीन जोड़ना भी संभव है। पूरी प्रक्रिया में लगभग 10 मिनट लगते हैं।

कैसे फॉस्फेट बफर खारा (पीबीएस) बनाने के लिए

1. निम्नलिखित वजन: 10.9 ग्राम निर्जल सोडियम फॉस्फेट डिबासिक (Na2HPO4), 3.2 ग्राम निर्जल सोडियम फॉस्फेट मोनोबैसिक (NaH2PO4) और 90 ग्राम सोडियम क्लोराइड (NaCl)।
2. उपरोक्त सभी को केवल 1 लीटर आसुत जल में घोलें।
3. पीएच मान को 7.4 में समायोजित करें।
4. 1 एल के अंतिम आयतन का घोल बनाएं।
5. (आवश्यक नहीं)। 0.5% ट्वीन 20 वाले घोल के लिए, ट्वीन 20 के 5 मिलीलीटर को 1 लीटर के घोल में मिलाएं।
6. उपयोग करने से पहले 10X पतला करें और यदि आवश्यक हो तो पीएच समायोजित करें।

• कमरे के तापमान पर रखो।
• गैर-फीमर अभिकर्मकों को प्रतिस्थापित किया जा सकता है, लेकिन आपको जोड़े गए पानी के अणुओं को समायोजित करने के लिए प्रत्येक के संबंधित द्रव्यमान को पुनर्गणना करना होगा।

पीबीएस बफर बनाने के लिए आपको क्या चाहिए

• एकल चरण सोडियम फॉस्फेट (निर्जल)
• डिबासिक सोडियम फॉस्फेट (निर्जल)
• सोडियम क्लोराइड
• स्केल और वज़न वाली नावें
• चुंबकीय उत्तेजक और उत्तेजक> पीएच जांच, कैलिब्रेटेड और उपयुक्त पीएच समायोजन समाधान
• 1 एल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क
• ट्वीन 20 (वैकल्पिक)