บัฟเฟอร์ฟอสเฟต pH 7 ก.1.2 การเตรียมสารละลายบัฟเฟอร์ฟอสเฟต
แอปพลิเคชัน
บัฟเฟอร์โซเดียมฟอสเฟตถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายเนื่องจากมีไอโซโทนิกและไม่เป็นพิษต่อเซลล์ PBS ใช้ในการละลายสารเพื่อล้างภาชนะที่มีเซลล์
การตระเตรียม
มีหลายวิธีในการเตรียมบัฟเฟอร์โซเดียมฟอสเฟต บางสูตรไม่มีโพแทสเซียม บางสูตรมีแคลเซียมหรือแมกนีเซียม
ในการเตรียมบัฟเฟอร์โซเดียมฟอสเฟตครั้งเดียว 1 ลิตร ให้ใช้:
- โซเดียมคลอไรด์ 8.00 ก
- เคซีแอล 0.20 ก
- 1.44 ก. นา 2 HPO 4
- 0.24 กรัม KH 2 PO 4
- ละลายในน้ำกลั่น 800 มล
- ปรับ pH เป็น 7.4 ด้วยกรดไฮโดรคลอริกหรือโซเดียมไฮดรอกไซด์
- เติมน้ำกลั่นเป็น 1 ลิตร
คุณสามารถเตรียมสารละลายสต๊อก PBS สิบลิตรได้โดยการละลาย NaCl 800 กรัม, KCl 20 กรัม, นา 2 HPO 4 144 กรัม และ KH 2 PO 4 24 กรัม ในน้ำกลั่น 8 ลิตร ทำให้มีปริมาตรสูงสุด 10 ลิตร ค่า pH ของสารละลายที่ได้จะอยู่ที่ประมาณ 6.8 แต่หลังจากการเจือจางเป็น 1X PBS จะเป็น 7.4 หลังจากเตรียมสารละลายแล้ว ให้ตรวจสอบค่า pH โดยใช้เครื่องวัด pH หากจำเป็น คุณสามารถปรับ pH ได้โดยใช้กรดไฮโดรคลอริกหรือโซเดียมไฮดรอกไซด์
ที่สุด ด้วยวิธีง่ายๆการเตรียมบัฟเฟอร์โซเดียมฟอสเฟตคือการใช้การเตรียมยาเม็ดที่มีขายทั่วไป แท็บเล็ตดังกล่าวถูกเจือจางด้วยน้ำกลั่นจนถึงปริมาตรที่กำหนดและได้รับสารละลายตามความเข้มข้นที่กำหนด
สำหรับการเพาะเซลล์ ควรแบ่งสารละลายและฆ่าเชื้อด้วยวิธีนึ่งฆ่าเชื้อ (20 นาทีที่ 121°C โหมดของเหลว) ไม่จำเป็นต้องฆ่าเชื้อ ขึ้นอยู่กับการใช้งาน คุณสามารถเก็บบัฟเฟอร์โซเดียมฟอสเฟตไว้ที่อุณหภูมิห้องได้ แต่เพื่อป้องกันการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย การจัดเก็บข้อมูลระยะยาวขอแนะนำให้ทำบัฟเฟอร์ที่ไม่ผ่านการฆ่าเชื้อในตู้เย็น เกลือในสารละลายเข้มข้นอาจตกตะกอนเมื่อถูกทำให้เย็น ดังนั้นก่อนใช้งาน แนะนำให้อุ่นสารละลายเข้มข้นเพื่อ อุณหภูมิห้องและรอจนตะกอนละลายหมด
หมายเหตุ
ดูเพิ่มเติม
มูลนิธิวิกิมีเดีย
2010.
น้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต: 1 ลิตร 10X
PBS: 1 ลิตรของ 10X (น้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต) เป็นสารละลายบัฟเฟอร์เข้มข้นที่พร้อมสำหรับการเจือจางเป็นสารละลายทำงาน 1X PBS ที่ใช้กันทั่วไปในการวิจัยทางชีววิทยา บัฟเฟอร์ PBS เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการรักษาค่า pH ให้คงที่ และเนื่องจากบัฟเฟอร์ PBS เป็นไอโซโทนิกและไม่เป็นพิษต่อเซลล์ จึงสามารถนำมาใช้ในการใช้งานทางชีวภาพได้หลากหลาย PBS มักใช้เป็นบัฟเฟอร์สำหรับล้างและเจือจาง และยังใช้เป็นสเปกตรัมอ้างอิงเมื่อตรวจวัดการดูดซับโปรตีนอีกด้วย
การใช้งาน
ก่อนใช้งาน ให้เจือจางสารละลาย 1X และกรองผ่านตัวกรองขนาด 0.22 µm ลงในขวดปลอดเชื้อ สร้างบัฟเฟอร์ 1X PBS 10 ลิตร โดยมีความเข้มข้นบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 0.01 โมลาร์, โพแทสเซียมคลอไรด์ 0.027 โมลาร์, โซเดียมคลอไรด์ 0.137 โมลาร์ และโพแทสเซียมฟอสเฟต 1.76 มิลลิโมลาร์ pH ของสารละลาย PBS จะอยู่ที่ประมาณ 7.4
- หากใช้บัฟเฟอร์ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ อาจจำเป็นต้องทำให้สารละลายปลอดเชื้อ บัฟเฟอร์ที่เจือจางล่วงหน้าสามารถจ่ายเป็นของเหลวและฆ่าเชื้อได้ด้วยการนึ่งฆ่าเชื้อ (20 นาที 121°C วงจรของเหลว)
- PBS สามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องได้ แต่สารละลายที่ไม่ผ่านการฆ่าเชื้ออาจรับประกันการแช่เย็นเพื่อป้องกันการเจริญเติบโตของแบคทีเรียเมื่อเวลาผ่านไป สารละลายเข้มข้นอาจตกตะกอนเมื่อเย็นลง และควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องจนกว่าตะกอนจะละลายหมดก่อนใช้งาน
ข้อมูลทางเทคนิค
| ค่า pH: | เมื่อเจือจางจนถึงความเข้มข้น 1X ค่า pH จะอยู่ที่ ~7.4 |
| พื้นที่จัดเก็บ: | เก็บที่อุณหภูมิห้อง |
| คำพ้องความหมาย: | น้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต |
| แอปพลิเคชัน: | สารละลายบัฟเฟอร์ที่ใช้กันทั่วไปในการวิจัยทางชีววิทยา |
ข้อมูลการสั่งซื้อ
| พื้นที่ใช้งาน: | การผลิต: | ซานตาครูซ |
| วิธี: | ||
| ปริมาณ: | 1 ลิตร | |
| แมว. ตัวเลข: | sc-24946 | |
| ราคา (รวมภาษีมูลค่าเพิ่ม 20%): | ตามคำขอ | เพิ่มลงในรถเข็น |
 ชื่อ: บัฟเฟอร์ PBS (น้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต), 10X, 1 ลิตร / น้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต: 1 ลิตร 10X หมายเหตุ: ความจำเพาะของชนิด: . คำอธิบาย: . แอปพลิเคชัน: . จัดส่งไปที่ น้ำแข็งสีฟ้า, การเก็บรักษาที่อุณหภูมิห้อง, | ||
รีเอเจนต์เกรดเคมีใช้ในการเตรียมสารละลายบัฟเฟอร์ และเกรดวิเคราะห์ที่จัดทำขึ้นเป็นพิเศษ การเตรียมรีเอเจนต์ดำเนินการดังนี้
โพแทสเซียมฟอสเฟตทดแทนเดี่ยว KH 2 PO 4 , น้ำหนักโมเลกุล 136.09. เมื่อได้รับความร้อนให้ละลายยา 100 กรัมในน้ำ 150 มล. สารละลายจะถูกกรองขณะร้อน ด้วยการกวนอย่างต่อเนื่อง สารกรองจะถูกทำให้เย็นลงถึง 10 ºС จากนั้นเติมเอทิลแอลกอฮอล์ 150 มล. ผลึกที่ปล่อยออกมาในระหว่างการกวนสารกรองอย่างต่อเนื่องจะถูกกรองออกโดยใช้กรวยดูด และตกผลึกอีกครั้งภายใต้สภาวะเดียวกัน ผลึกจะถูกทำให้แห้งโดยมีน้ำหนักคงที่ที่อุณหภูมิ 105…110 ºС หากมียาที่มีปริมาณสารหลักอยู่ในช่วง 99.9...100.0% จะไม่มีการเตรียมสารเบื้องต้น
โซเดียมฟอสเฟตที่ถูกแทนที่, Na 2 HPO 4 · 12H 2 O, น้ำหนักโมเลกุล 358.12 มีสองวิธีในการเตรียมยา
ก) ละลายยา 150 กรัมในน้ำ 150 มล. เมื่อถูกความร้อนถึง 100 0 C สารละลายจะถูกกรองร้อนและหลังจากเย็นลงผลึกที่ตกตะกอนจะถูกกรองออก การตกผลึกซ้ำจะเกิดขึ้นซ้ำโดยให้ความร้อนถึง 100 ºС ยาที่ตกผลึกใหม่จะถูกให้ความร้อนในถ้วยพอร์ซเลนในอ่างน้ำโดยคนอย่างต่อเนื่องจนกระทั่งยาแห้งสนิท เกลือที่ได้จะถูกทำให้แห้งในเครื่องดูดความชื้นเหนือแคลเซียมคลอไรด์ที่หลอมละลายเป็นเวลา 24 ชั่วโมง มีการตรวจสอบเนื้อหาของสารหลักในการเตรียมการตกผลึกซ้ำ (Na 2 HPO 4 ·2H 2 O) ในการทำเช่นนี้ให้ละลายยาประมาณ 0.5,000 กรัมในน้ำ 50 มล. เติมสารละลายโซเดียมคลอไรด์อิ่มตัว 2...3 มล. และไตเตรทด้วยสารละลายกรดไฮโดรคลอริก 0.1 N โดยมีตัวบ่งชี้เมทิลเรด หากจำเป็น ให้ปรับขนาดตัวอย่าง สารละลายกรดไฮโดรคลอริก 0.1 N 1 มิลลิลิตรตรงกับ 0.0178 กรัมของ Na 2 HPO 4 2H 2 O
b) ยา 75 กรัมละลายในน้ำ 250 มล. ที่ให้ความร้อนถึง 60 ºС สารละลายจะถูกกรองในขณะที่ร้อน สารกรองจะถูกทำให้เย็นลงโดยคนคงที่ที่อุณหภูมิ 10 ºС ผลึกที่ตกตะกอนจะถูกกรองออกโดยใช้กรวยดูดและตกผลึกอีกครั้งภายใต้สภาวะเดียวกัน เกลือที่ได้จะถูกทำให้แห้งครั้งแรกที่อุณหภูมิไม่เกิน 30 ºС เป็นเวลา 24 ชั่วโมง จากนั้นนำไปอบแห้งต่อในเตาอบที่อุณหภูมิ 50 ºС เป็นเวลา 3...4 ชั่วโมง และสุดท้ายที่ 120±5 ºС โดยให้น้ำหนักคงที่ เพื่อป้องกันไม่ให้เกลือ จากการละลาย หลังจากการอบแห้งเกลือมีองค์ประกอบ Na 2 HPO 4
หลังจากเตรียมรีเอเจนต์ ให้เตรียมสารละลายเริ่มต้นของโพแทสเซียมฟอสเฟตที่ถูกแทนที่เชิงเดี่ยวและโซเดียมฟอสเฟตไดเบสิก
ตัวอย่างของแอนไฮดรัสโพแทสเซียมฟอสเฟตทดแทนเดี่ยว KH 2 PO 4 ที่มีน้ำหนัก 9.078 กรัมถูกละลายในน้ำและปริมาตรของสารละลายจะถูกปรับเป็น 1 ลิตร เพื่อให้สารละลายคงตัว ให้เติมโทลูอีน 3...4 หยด
ตัวอย่างของโซเดียมฟอสเฟตที่ถูกแทนที่ Na 2 HPO 4 ·12H 2 O ซึ่งมีน้ำหนัก 11.876 กรัม ถูกละลายในน้ำและปริมาตรของสารละลายจะถูกปรับเป็น 1 ลิตร เพื่อให้สารละลายคงตัว ให้เติมโทลูอีน 3...4 หยด
สารละลายบัฟเฟอร์ฟอสเฟตที่มีค่า pH ตั้งแต่ 4.94 ถึง 9.18 เตรียมจากสารละลายเริ่มต้นตามตารางที่ ก.2
ตารางที่ก.2 - สารละลายบัฟเฟอร์ฟอสเฟตที่มีค่า pH 4.94...9.18
| ค่า pH | สารละลาย Na 2 HPO 4 · 12H 2 O, ml | สารละลาย KH 2 PO 4, มล |
| 4,94 | 1,0 | 99,0 |
| 5,29 | 2,5 | 97,5 |
| 5,59 | 5,0 | 95,0 |
| 5,91 | 10,0 | 90,0 |
| 6,24 | 20,0 | 80,0 |
| 6,47 | 30,0 | 70,0 |
| 6,64 | 40,0 | 60,0 |
| 6,81 | 50,0 | 50,0 |
| 6,98 | 60,0 | 40,0 |
| 7,17 | 70,0 | 30,0 |
| 7,38 | 80,0 | 20,0 |
| 7,73 | 90,0 | 10,0 |
| 8,04 | 95,0 | 5,0 |
| 8,34 | 97,5 | 2,5 |
| 8,67 | 99,0 | 1,0 |
| 9,18 | 100,0 | 0,0 |
วันที่เพิ่ม: 2015-08-06 | เข้าชม: 4058 |
2. บัฟเฟอร์ฟอสเฟต (0.1 ม., pH 5.8-8.0)
|
นา 2 HPO 4 0.2 ม. มล |
นา 2 H 2 PO 4 0.2 ม. มล | ||
3. ทริสบัฟเฟอร์ (0.1 ม., pH 7.1-9.2)
ทริส-(ไฮดรอกซีเมทิล) อะมิโนมีเทน 24.2 กรัมละลายในขวดวัดปริมาตรขนาด 1 ลิตร (ใน H 2 O 500 มล.) เพื่อให้ได้ค่า pH ที่ต้องการ ให้เติมปริมาตร 1 M HCl ที่ระบุในตาราง และปรับปริมาตรด้วยน้ำกลั่นให้เป็น 1,000 มล.
4. บัฟเฟอร์อะซิเตท (0.2 ม., pH 3.6-5.8)
|
โซเดียมอะซิเตต 0.2 M, ml |
กรดอะซิติก 0.2 M, ml |
โซเดียมอะซิเตต 0.2 M, ml |
กรดอะซิติก 0.2 M, ml | ||
5. บัฟเฟอร์ไกลซีน (0.05 ม., pH 8.6-10.6)
ผสมไกลซีนและโซเดียมไฮดรอกไซด์ในปริมาตรที่ระบุ แล้วปรับปริมาตรด้วยน้ำกลั่นให้เป็น 200 มล.
|
ไกลซีน 0.2 ม. มล |
NaOH 0.2 M, มล |
ไกลซีน 0.2 ม. มล |
NaOH 0.2 M, มล |
||
3. การเตรียมรีเอเจนต์บางชนิด
กำลังเปิดใช้งานโซลูชัน- ใส่กลูตาไธโอนรีดิวซ์ 155 มก. และอัลบูมินผลึก 400 มก. ลงในขวดวัดปริมาตรขนาด 100 มล. ละลายในน้ำกลั่น 50 มล. และปรับ pH เป็น 8.2 โดยใช้สารละลาย NaOH 1 โมลาร์ จากนั้นเติมน้ำตามเครื่องหมาย
สารละลายแอมโมเนียของซิลเวอร์ไนเตรต- สารละลายแอมโมเนียเข้มข้นจะถูกเติมลงในสารละลายเงิน 2-3% จนกระทั่งตะกอนละลาย
สารละลายบัฟเฟอร์อะซิเตต pH 3.6- เตรียมโดยการผสมสารละลาย A 463 มล. และสารละลาย B 37 มล. เจือจางด้วยน้ำในขวดปริมาตรจนถึงเครื่องหมาย 1 ลิตร สารละลาย A: กรดอะซิติกน้ำแข็ง 11.55 มล. เจือจางด้วยน้ำในขวดวัดปริมาตรขนาด 1 ลิตร สารละลาย B: โซเดียมอะซิเตต 27.2 กรัมละลายในน้ำในขวดขนาด 1 ลิตร
รีเอเจนต์ของไบยูเรต (รีเอเจนต์ของเบเนดิกต์)- โซเดียมซิเตรต 173 กรัมและโซเดียมคาร์บอเนต 100 กรัมละลายในน้ำกลั่น 300 มล. ในอ่างน้ำ แยกคอปเปอร์ซัลเฟต 17.3 กรัมละลายในน้ำ 300 มล. สารละลายทั้งสองถูกระบายออกและปริมาตรรวมจะอยู่ที่ 1 ลิตร
สารละลายบัฟเฟอร์- เวโรนัล 2.76 กรัมและเมดินัล 2.06 กรัมละลายในน้ำกลั่น 1 ลิตร เก็บในตู้เย็น หากมีตะกอนปรากฏ แสดงว่าสารละลายไม่เหมาะสำหรับการใช้งาน
การระงับถ่านหิน- ใส่ถ่านกัมมันต์ 0.25 กรัมในขวดวัดปริมาตรขนาด 100 มล. และเจือจางด้วยบัฟเฟอร์อะซิเตต pH 3.6 เขย่าให้ละเอียดก่อนใช้
ลดรีเอเจนต์- สารละลายกรดแอสคอร์บิก 1% ที่เตรียมด้วยสารละลายคอปเปอร์ซัลเฟต 0.016%
เฮโมโกลบิน สารละลาย 4% ในบัฟเฟอร์อะซิเตต (pH 4.0)- ขั้นแรก เตรียมสารละลายฮีโมโกลบิน 8% ในสารละลายยูเรีย 8 โมล/ลิตร เก็บไว้ในเทอร์โมสตัทที่อุณหภูมิ 60°C เป็นเวลา 2 ชั่วโมง และเจือจาง 2 ครั้งด้วยบัฟเฟอร์อะซิเตตก่อนใช้งาน
ไกลซิล-ไกลซีน- 0.55 มิลลิโมล/ลิตร, pH – 8.3 ไกลซิล-ไกลซีน 3.63 กรัมใส่ในขวดวัดปริมาตรขนาด 50 มล. และเติมน้ำตามเครื่องหมาย (สารละลายบัฟเฟอร์)
โซลูชั่นการทำให้เสียสภาพ
Diazoreagent สำหรับการตรวจหาบิลิรูบิน- เตรียมวิธีแก้ปัญหาสองประการ วิธีแก้ปัญหาแรก: กรดซัลโฟนิลิก 3 กรัมละลายในน้ำกลั่น 500 มล. เติมกรดไฮโดรคลอริกเข้มข้น 15 มล. (ในอ่างน้ำร้อน) ปริมาตรจะถูกปรับเป็น 1 ลิตรด้วยน้ำ วิธีที่สอง: สารละลายโซเดียมไนไตรท์ที่เป็นน้ำ 0.5% ก่อนใช้งาน ให้ผสมสารละลายแรก 5 มล. และสารละลายที่สอง 0.25 มล.
Diacetyl วิธีแก้ปัญหาการทำงาน- diacetyl 1 มล. เจือจางด้วยน้ำกลั่นในขวดปริมาตร 100 มล. (สารละลายถูกเก็บไว้ในตู้เย็น) เตรียมสารละลายไดอะซิติลที่ใช้งานได้ก่อนใช้งานโดยเติมน้ำกลั่น 24 มล. ลงในสารละลายสต๊อกไดอะซิติล 1 มล.
รีเอเจนต์ไดฟีนิลามีน- ไดฟีนิลามีน 1 กรัมละลายในกรดอะซิติกน้ำแข็ง 100 มล. เติมกรดซัลฟิวริกเข้มข้น 2.75 มล. ลงในสารละลาย
โซลูชันการสอบเทียบ- พื้นฐาน - 0.75 มิลลิโมล/ลิตร ALA (100 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ในรูปของเบส: ALA ไฮโดรคลอไรด์ 0.00635 กรัมละลายในบัฟเฟอร์อะซิเตต pH 3.6 ในขวดวัดปริมาตรขนาด 50 มล. เก็บในตู้เย็นได้ไม่เกินหนึ่งเดือน สารละลายสอบเทียบที่ใช้งานได้ 1 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร เตรียมจากสารละลายหลัก ก่อนใช้งาน ให้เจือจางสารละลายสต็อกด้วยอะซิเตทบัฟเฟอร์ 100 ครั้ง
โซลูชันการสอบเทียบ- ไดไฮดรอกซีอะซิโตน 22.5 มก. ละลายในน้ำ 25 มล. เมื่อถูกความร้อน สารละลายดังกล่าว 1 มิลลิลิตรประกอบด้วยไดออกซีอะซิโตน 10 µmol สารละลายสอบเทียบไดออกซีอะซิโตนจะถูกเทลงในหลอดทดลองหลายชุด (ดูงาน) เติมจนได้ปริมาตรที่ต้องการจากนั้นปฏิกิริยาจะดำเนินการในลักษณะเดียวกับเมื่อพิจารณากิจกรรมของเอนไซม์
สารละลายเหล็กสำหรับสอบเทียบ (มาตรฐาน) (30 µmol/l).
ขั้นแรก เตรียมเกลือของมอร์
รีเอเจนต์คาเฟอีน- คาเฟอีนบริสุทธิ์ 1 กรัม, โซเดียมเบนโซเอต 7.5 กรัม, โซเดียมอะซิเตต 12.5 กรัมละลายในน้ำกลั่น 90 มล. ตั้งอุณหภูมิให้ร้อนถึง 50-60°C กวน ระบายความร้อน และปรับเป็น 100 มล. ด้วยน้ำกลั่น
แอมโมเนียมโมลิบเดตในกรดไนตริก- แอมโมเนียมโมลิบเดต 7.5 กรัมละลายในน้ำ 100 มล. และเติมกรดไนตริก 32% 100 มล.
ปัสสาวะสำหรับภาวะอัลแคปโตนูเรีย- ในกรณีที่ไม่มีพยาธิสภาพ ให้เติมไฮโดรควิโนนในปัสสาวะปกติในอัตรา 20 กรัม/ลิตร
ปัสสาวะด้วยภาวะกรดในเลือดสูง- ในกรณีที่ไม่มีพยาธิสภาพ ให้เติมไกลซีนในปัสสาวะปกติในอัตรา 1.0 กรัม/ลิตร
ปัสสาวะใน mucopolysaccharidosis- ในกรณีที่ไม่มีพยาธิสภาพ ให้เติมฮอนซูไรด์หรือเฮปารินในปัสสาวะปกติในอัตรา 0.05-0.1 กรัม/ลิตร
ปัสสาวะด้วยเพนโตซูเรีย- หากไม่มีพยาธิสภาพ ให้เติมไซลูโลสหรือไรโบสในปัสสาวะในอัตรา 1.0 กรัม/ลิตร
ปัสสาวะด้วยไทโรซิโนซิส- ในกรณีที่ไม่มีพยาธิสภาพ ให้เติมไทโรซีนในปัสสาวะปกติในอัตรา 0.4-0.5 กรัม/ลิตร
ปัสสาวะด้วย fructosuria- ในกรณีที่ไม่มีพยาธิสภาพ ให้เติมฟรุกโตสในปัสสาวะปกติในอัตรา 0.3-0.4 กรัม/ลิตร
ปัสสาวะด้วย cystinuria- ในกรณีที่ไม่มีพยาธิสภาพ ให้เติมซีสตีนในปัสสาวะปกติในอัตรา 0.4-0.5 กรัม/ลิตร
โซเดียมอะซิเตต 3 สารละลายอิ่มตัว- โซเดียมอะซิเตต 3 น้ำ 375 กรัม (หรือเกลือปราศจากน้ำ 226 กรัม) ละลายในน้ำอุ่น 250 มล. ปล่อยให้เย็นจนถึงอุณหภูมิห้อง เก็บที่อุณหภูมิห้อง สารละลายควรไม่มีสีและโปร่งใส
โซเดียมฟอสเฟตแทนที่ 0.25 โมล/ลิตร เตรียมโดยการละลาย Na 2 HPO 4 ∙12H 2 O 9.7 กรัม หรือ 18 กรัม Na 2 HPO 4 ∙12H 2 O ในน้ำในขวดขนาด 200 มล. เมื่อเติมสารละลายนี้ 2 มิลลิลิตรลงในสารละลายกรดไตรคลอโรอะซิติก 1 มิลลิลิตร ค่า pH ควรอยู่ระหว่าง 5.0-6.0
สารละลายสอบเทียบครีเอตินีนพื้นฐาน 10 มิลลิโมล/ลิตร- ปรับครีเอตินีน 113.1 มก. เป็น 100 มล. ด้วยสารละลายกรดไฮโดรคลอริก 0.1 โมล/ลิตร เมื่อสร้างกราฟการสอบเทียบ สารละลายสำหรับการทำงานจะถูกเตรียมจากสารละลายสต็อกโดยการเจือจางสารละลายสต็อกด้วยน้ำ 100 เท่า สารละลาย 1 มิลลิลิตรประกอบด้วยครีเอตินีน 0.1 มิลลิโมล จากนี้จะได้รับชุดหลอดทดลองที่มีความเข้มข้นของครีเอทีนที่เหมาะสม
ของผสมออกซิเดชันสำหรับการกำหนดไทอามีน- โพแทสเซียมเฮกซายาโนเฟอร์เรต (III) 1% 8 มล. เติมสารละลาย NaOH 30% 20 มล. แล้วผสมให้เข้ากัน เตรียมความพร้อมก่อนการใช้งาน
รีเอเจนต์ออร์ซีน- เติมกรดไฮโดรคลอริก 30% 500 มล. (ความหนาแน่น 1.15 ก./ซม.3) ลงในออร์ซิน 1 กรัม คนจนละลายและเติมสารละลายเหล็ก (III) คลอไรด์ FeCl 3 4-5 มิลลิลิตร 10% รีเอเจนต์จะถูกเก็บไว้ในขวดสีเข้มที่ปิดสนิท
โซลูชันการสอบเทียบพื้นฐาน p-nitroaniline- ใส่ p-nitroaniline 0.0829 กรัมในขวดวัดปริมาตรขนาด 100 มล. เจือจางด้วยน้ำจนถึงเครื่องหมายแล้วละลาย
สารละลายตกตะกอน- ละลายแอมโมเนียมซัลเฟต 561 กรัมในน้ำกลั่น 1 ลิตร แล้วกรองหลังจากผ่านไป 24 ชั่วโมง
สารละลายบัฟเฟอร์ฟอสเฟตพื้นฐานและสารละลายทำงานหมายเลข 1-4- ละลาย NaOH 33.5 กรัมในน้ำ 400 มล. ในขวดวัดปริมาตรขนาด 500 มล. และเติม KH 2 PO 4 226.8 กรัม เขย่าจนละลายหมด เย็นและเติมน้ำตามเครื่องหมาย เพื่อเตรียมสารละลายสำหรับการทำงานของบัฟเฟอร์ฟอสเฟตพื้นฐาน ให้วัดปริมาตรของบัฟเฟอร์ฟอสเฟตพื้นฐาน (เป็นมล.) ต่อไปนี้ในขวดวัดปริมาตรขนาด 100 มล.: หมายเลข 1 – 92.51; หมายเลข 2 – 74.91; หมายเลข 3 – 59.18 และหมายเลข 4 – 48.68 หลังจากนั้นให้นำสิ่งที่บรรจุอยู่ในเครื่องหมายนั้นด้วยน้ำ
กรดพิริก สารละลายอิ่มตัว- กรดพิคริกเชิงพาณิชย์มีความชื้น 15-20% อย่าทำให้กรดแห้ง ระเบิด! ละลายกรดพิริก 2 กรัมในน้ำ 100 มล. ขณะอุ่นในอ่างน้ำร้อน หลังจากนี้ สารละลายจะคงอยู่เป็นเวลา 24 ชั่วโมง โดยคนเป็นครั้งคราว จากนั้นจึงกรองสารละลาย สารละลายมีความเสถียรและเก็บไว้ในภาชนะแก้วสีเข้ม
บัฟเฟอร์ไพโรฟอสเฟต 0.05 โมลาร์ pH 8.2- ถ่ายโอนโซเดียมไพโรฟอสเฟต 4.46 กรัมลงในขวดปริมาตร 200 มล. ละลายในน้ำประมาณ 100 มล. ปรับ pH เป็น 8.2 ด้วยสารละลาย HCl 0.1 M แล้วเติมน้ำกลั่นลงไปตามที่กำหนด
บัฟเฟอร์ไพโรฟอสเฟต 0.1 โมลาร์ pH 8.5- โอนโซเดียมไพโรฟอสเฟต 4.46 กรัมลงในขวดปริมาตร 100 มล. ละลายในน้ำ 50 มล. ปรับ pH เป็น 8.5 ด้วยสารละลาย HCl 0.1 M แล้วเติมน้ำกลั่นตามเครื่องหมาย
รีเอเจนต์ทำงาน- เตรียมในวันที่กำหนดโดยผสมโซเดียมไฮดรอกไซด์ 0.3 นอร์มัล 30 ส่วน สารละลายฟีนอล์ฟทาลีน 0.5% 2 ส่วน และสารละลายคอปเปอร์ซัลเฟต 0.12% 1 ส่วน
สารละลายอะซิโตนไซยาโนไฮดริน- ละลายอะซิโตนไซยาโนไฮดริน 1 หลอด (0.5 มล. - 0.47 กรัมจากชุดตรวจวัดฮีโมโกลบินในเลือด) ในน้ำกลั่น 1 ลิตร
สารละลายเฟอร์เรียซีโตน ไซยาโนไฮดริน- ละลายโพแทสเซียมเหล็กซัลไฟด์ 200 มก. และอะซิโตนไซยาโนไฮดริน 1 แอมป์ (0.5 มล. - 0.47 กรัม) ในน้ำกลั่น 1 ลิตร: คุณสามารถใช้จากชุดรีเอเจนต์เพื่อเตรียมสารละลายเปลี่ยนรูปเพื่อกำหนดฮีโมโกลบินในเลือด คงตัวได้นานหลายเดือนเมื่อเก็บในภาชนะแก้วสีเข้มที่อุณหภูมิห้อง
สารละลายกลูโคซิเดส- มีประมาณ 300 ยูนิต ใน 1 มก. เตรียมโดยละลายยาแห้งในปริมาณที่เหมาะสมในน้ำ 10 มิลลิลิตร
สารละลายบาโท-ฟีแนนโทรลีนที่มีซัลโฟเนต- ในหลอดทดลอง เติมกรดคลอโรซัลโฟนิก 0.5 มล. ลงในบาโท-ฟีแนนโทรลีน 100 มก. โดยให้ความร้อนในอ่างน้ำเดือดเป็นเวลา 30 วินาที ทำให้เย็นลง และค่อยๆ เติมน้ำกลั่นสองครั้ง 10 มล. แล้วให้ความร้อนอีกครั้งในอ่างน้ำสำหรับ 5 นาที ส่วนผสมถูกถ่ายโอนไปยังขวดขนาด 200 มล. เติมน้ำ 100 มล. ปรับ pH ของสารละลายเป็น 4-5 N NaOH และเติมน้ำลงในปริมาตร 200 มล.
สารละลายไอโอดีนในโพแทสเซียมไอโอไดด์ (สารละลายของ Lugol)- โพแทสเซียมไอโอไดด์ 20 กรัมและไอโอดีน 10 กรัมละลายในน้ำกลั่น 100 มล. ก่อนใช้งานให้เจือจางสารละลาย 5 ครั้ง
สารละลาย p-ไนโตรโซไดเมทิลอะนิลีน (NDMA)- การเตรียม NDMA ที่มีจำหน่ายในท้องตลาดได้รับการตกผลึกใหม่จากเอทิลอีเทอร์ ในการวัดแอลกอฮอล์ดีไฮโดรจีเนส NDMA 1 มก. จะถูกละลายในบัฟเฟอร์ไพโรฟอสเฟต 0.1 โมลาร์ 100 มล. (pH 8.5) สารละลายที่ได้จะถูกกรองผ่านตัวกรองกระดาษ และสารกรองจะถูกเจือจาง 2 ครั้งด้วยบัฟเฟอร์นั้น เก็บที่อุณหภูมิ 4°C ได้นานสองเดือน
รีเอเจนต์ของอิลคา- อะซิติกแอนไฮไดรด์ 5 ส่วน (โดยปริมาตร) เติมกรดอะซิติกน้ำแข็ง 1 ส่วน จากนั้นค่อยๆ เทกรดซัลฟิวริกเข้มข้น 1 ส่วนลงไป รักษาความเย็นของรีเอเจนต์!
รีเอเจนต์ของมิลลอน. (ทำอาหารภายใต้ความกดดัน! ) ปรอท 40 กรัมละลายในกรดไนตริกเข้มข้น 57 มล. ขั้นแรกในความเย็นแล้วจึงอุ่นในอ่างน้ำ สารละลายที่ได้จะถูกเจือจางด้วยน้ำ 2 ปริมาตร ปล่อยให้ตกตะกอนและระบายออกจากตะกอน เก็บในขวดแก้วสีเข้ม
รีเอเจนต์แอมโมเนียมโมลิบเดต- แอมโมเนียมโมลิบเดต 2.5 กรัมละลายในน้ำกลั่น 60 มล. แล้วกรอง เติมสารละลายลงในขวดขนาด 100 มล. ในขวดอีกใบหนึ่ง เติมกรดซัลฟิวริกเข้มข้น 7.5 มล. ลงในน้ำกลั่น 25 มล. สารละลายที่สองเทลงในสารละลายแรก ระบายความร้อน และปรับให้เข้ากับเครื่องหมายด้วยน้ำกลั่น วิธีแก้ปัญหานี้เหมาะสำหรับหนึ่งเดือน
รีเอเจนต์ "NADI"- สารละลาย dimethyl-p-phenylenediamine 1% ผสมกับสารละลายα-naphthol 1% ในแอลกอฮอล์ในปริมาณเท่ากันและสารละลายโซเดียมคาร์บอเนต 1.5% สารละลายเป็นสีน้ำตาลเข้มและไม่ควรมีโทนสีชมพู เตรียมตัวก่อนเรียน 1 ชั่วโมง
รีเอเจนต์ของเรา- เติมแอมโมเนียมอะซิเตต 15.4 กรัม, กรดอะซิติกน้ำแข็ง 0.3 กรัม และอะซิติลาซีโตน 0.2 กรัม ลงในขวดขนาด 100 มล. ละลายในน้ำกลั่น และปรับปริมาตรตามเครื่องหมาย
รีเอเจนต์ของเนสเลอร์- ในขวดปริมาตรขนาด 500 มล. ผสมโพแทสเซียมไอโอไดด์ 150 กรัม ไอโอดีน 110 กรัม น้ำกลั่น 100 มล. และปรอทโลหะประมาณ 140-150 กรัม แล้วเขย่าแรงๆ เป็นเวลา 15 นาที ในกรณีนี้ สารละลายจะร้อนขึ้นเอง และสีที่เกิดจากไอโอดีนที่ละลายจะค่อยๆ จางลง จากนั้นส่วนผสมจะเริ่มเย็นลงใต้น้ำไหลจนกระทั่งคงสีแดงไว้อย่างชัดเจน หลังจากนั้นจึงเขย่าส่วนผสมจนสีแดงเปลี่ยนเป็นสีเขียว หลังจากเทออกแล้ว ตะกอนปรอทจะถูกล้างด้วยน้ำสะอาดให้สะอาด รวมสารละลายและน้ำล้างแล้วเจือจางด้วยน้ำเป็น 2 ลิตร นำสารละลายที่ได้ 75 มล. ลงในขวดปริมาตร 0.5 ลิตรที่ประกอบด้วยน้ำ 75 มล. และสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 350 มล. 350 มล. แล้วเจือจางด้วยน้ำจนถึงเครื่องหมาย
รีเอเจนต์ของ Fehling- เตรียมโซลูชันสองรายการแยกกัน โซลูชันที่ 1: ละลายเกลือโรเชลล์ 200 กรัม และ NaOH 150 กรัม ในขวดวัดปริมาตร 1 ลิตร แล้วเจือจางด้วยน้ำ โซลูชันที่ 2: ในขวดวัดปริมาตรขนาด 1 ลิตร ละลายคอปเปอร์ซัลเฟต (II) 40 กรัมในน้ำ แล้วเติมน้ำให้เท่ากับเครื่องหมาย ก่อนใช้งาน ให้ผสมสารละลายเหล่านี้ในปริมาณเท่ากัน
รีเอเจนต์ของโฟลิน- ในขวดขนาด 1 ลิตร ละลายโซเดียม tungstate 1 กรัม และกรดฟอสโฟโมลิบดิก 20 กรัม ในน้ำ 750 มิลลิลิตร ปิดขวดด้วยจุกกรดไหลย้อนแล้วเปิดการไหลของน้ำในตู้เย็นต้มเนื้อหาเป็นเวลา 10 ชั่วโมง จากนั้นจึงทำให้เย็นลง เทลงในขวดปริมาตร และปริมาตรน้ำของตัวทำปฏิกิริยาจะถูกปรับเป็น 1 ลิตร
น้ำยาของเออร์ลิช- p-dimethylaminobenzaldehyde 0.7 กรัมละลายในกรดไฮโดรคลอริกเข้มข้น 150 มล. เติมลงในน้ำ 100 มล. แล้วผสม สารละลายควรไม่มีสีหรือสีเหลืองเล็กน้อย เก็บในภาชนะแก้วสีเข้ม รีเอเจนต์มีความเสถียร
น้ำยาของเออร์ลิช- p-dimethylaminobenzaldehyde 1 กรัมละลายในขวดปริมาตรขนาด 50 มล. ในกรดอะซิติกน้ำแข็ง 35 มล. เติมกรดเปอร์คลอริก 57% 8 มล. และเติมกรดอะซิติกน้ำแข็งให้ถึงเครื่องหมาย เก็บในภาชนะแก้วสีเข้มในตู้เย็นไม่เกินหนึ่งสัปดาห์
สารละลายแอลกอฮอล์ของไทมอล (10%)- ไทมอลบริสุทธิ์ 10 กรัมละลายในเอทิลแอลกอฮอล์96˚ 100 มล. การเตรียมไทมอลบริสุทธิ์ดำเนินการดังนี้ ไทมอล 100 กรัมละลายในเอทิลแอลกอฮอล์96˚ 100 มล. แล้วกรอง เติมน้ำกลั่นเย็น 1 ลิตรลงในตัวกรอง เขย่าแรงๆ แล้วปล่อยทิ้งไว้ 20 นาที ตัวกรองและคริสตัลที่เหลืออยู่บนตัวกรองจะถูกล้างสองครั้งด้วยน้ำกลั่นเย็น แห้งก่อนบนกระดาษกรอง จากนั้นเป็นเวลา 2-3 วันในเครื่องดูดความชื้นเหนือแคลเซียมคลอไรด์ปราศจากน้ำจนกระทั่งมีน้ำหนักคงที่
โซลูชั่นมาตรฐาน- การเตรียมสารละลายมาตรฐานดำเนินการโดยการผสมสารละลายสองชนิด: 1) สารละลายแบเรียมคลอไรด์ 0.0962 N: ผลึก BaCl 1.175 กรัม 2 ∙2H 2 O ละลายในน้ำ 100 มิลลิลิตรในขวดวัดปริมาตร 2) 0.2 N สารละลายกรดซัลฟิวริก ถัดไปจะได้สารแขวนลอยของแบเรียมซัลเฟต: สารละลายแบเรียมคลอไรด์ 0.0962 N 3 มล. เทลงในขวดปริมาตร 100 มล. และปรับปริมาตรด้วยสารละลายกรดซัลฟิวริก 0.2 N ที่อุณหภูมิ +10°C ( ที่อุณหภูมินี้ ขนาดอนุภาคของแบเรียมซัลเฟตที่ตกตะกอนจะให้ผลลัพธ์ที่ค่อนข้างคงที่)
สารละลายบัฟเฟอร์ซับสเตรต: เทน้ำ 10 มล. ลงในหลอดทดลอง แล้วเติม L-glutamyl-p-nitroaniline 0.028 กรัม และโซเดียมคลอไรด์ 0.082 กรัม และละลายสารในหลอดทดลองในอ่างน้ำเดือดโดยไม่หยุดกวนเป็นเวลา 60 วินาที . จากนั้นสารละลายจะถูกทำให้เย็นลงถึง 37°C และเติมสารละลายบัฟเฟอร์ 2.5 มิลลิลิตร ในระหว่างการทำงาน สารละลายซับสเตรตที่เตรียมไว้จะถูกเก็บไว้ในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 37°C สารละลายพื้นผิวที่ไม่ได้ใช้สามารถเก็บไว้ในตู้เย็นได้นานถึงหนึ่งสัปดาห์ สารตั้งต้นละลายได้ไม่ดีและตกตะกอนที่อุณหภูมิห้อง ดังนั้นก่อนการใช้งาน สารตั้งต้นที่ตกผลึกจะถูกละลายโดยการให้ความร้อนในอ่างน้ำเดือด การทำความร้อนและการละลายพื้นผิวสามารถทำซ้ำได้ไม่เกินสองครั้ง
สารละลายพื้นผิวสำหรับกำหนด ALT (สารละลายหมายเลข 1)- ตัวอย่างกรด α-คีโตกลูตาริก 29.2 มก. และอะลานีน 1.78 กรัม (α-อะลานีน 0.89 กรัม) ได้รับการชั่งน้ำหนักบนเครื่องชั่งเชิงวิเคราะห์และละลายในสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 1 โมลาร์ จนกระทั่งตะกอนละลายหมด (pH 7.4) เทสารละลายลงในขวดขนาด 100 มล. และปรับปริมาตรตามเครื่องหมายด้วยบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 0.1 โมลาร์ (pH 7.4) เติมคลอโรฟอร์ม 1 หยด สารละลายจะถูกเก็บไว้ในตู้เย็น
สารละลายพื้นผิวสำหรับกำหนด AST (สารละลายหมายเลข 2)- ตัวอย่างของกรด α-คีโตกลูตาริก 29.2 มก. และกรด α-แอสปาร์ติก 2.66 กรัม (กรด α-แอสปาร์ติก 1.33 กรัม) ได้รับการชั่งน้ำหนักบนเครื่องชั่งเชิงวิเคราะห์ จากนั้นเตรียมสารละลายในลักษณะเดียวกับสารละลายหมายเลข 1
สารละลายพื้นผิวสำหรับกำหนดปริมาณไอโซเมอเรสของกลูโคสฟอสเฟต- เตรียมสารละลายบัฟเฟอร์เมดินัล-อะซิเตตที่มีค่า pH 7.4 (โซเดียมอะซิเตต 9.714 กรัม และเมดินัล 14.714 กรัมละลายในน้ำและปรับปริมาตรเป็น 500 มิลลิลิตร) ผสมเกลือไดโซเดียมของกลูโคส-6-ฟอสเฟต 8.33 มล. ของสารละลาย 0.03 โมลาร์ กับบัฟเฟอร์อะซิเตตเมดินัล 25 มล. เติมสารละลายกรดไฮโดรคลอริก 0.1 โมลาร์ 25 มล. ลงในส่วนผสมและเจือจางด้วยน้ำเป็น 100 มล. เก็บในที่เย็น
สารละลายซับสเตรตสำหรับการกำหนดแลคเตตดีไฮโดรจีเนส- ผสมสารละลายโซเดียมแลกเตต 1 มิลลิลิตร, สารละลาย NaCl 9 โมลาร์, สารละลาย NAD 0.05 โมลาร์ 2 ด้วยความเข้มข้น 10 กรัม/ลิตร เติมสารละลายบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 0.5 โมลาร์ (pH 7.4) 2.5 มิลลิลิตร และสารละลายไนโตรเตตราโซเลียม บลู 1 กรัม/ลิตร ก่อนใช้งาน ให้เติมสารละลายฟีแนนซีน เมตาซัลเฟต 0.25 มล. ที่มีความเข้มข้น 1 กรัม/ลิตร ลงในส่วนผสม
สารละลายพื้นผิวสำหรับกำหนดปริมาณฟรุกโตส บิสฟอสเฟต อัลโดเลส- เกลือแบเรียมของฟรุกโตสบิสฟอสเฟต 270 มก. ละลายในสารละลายกรดไฮโดรคลอริก 1 M 3.5 มล. เติมสารละลายโซเดียมซัลเฟต 14% 1 มิลลิลิตร และตะกอนที่ได้จะถูกกำจัดออกโดยการหมุนเหวี่ยง เติมโซเดียมซัลเฟต 1 หยดลงในส่วนลอยเหนือตะกอน การปรากฏตัวของความขุ่นบ่งชี้ว่าการตกตะกอนของแบเรียมไอออนไม่สมบูรณ์เพียงพอ ในกรณีนี้ ให้เติมโซเดียมซัลเฟตและปั่นแยกอีกครั้ง เครื่องหมุนเหวี่ยงถูกปรับด้วยสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 3% เป็น pH 7.4-7.6 แล้วถ่ายโอนไปยังขวดขนาด 25 มล. และปริมาตรจะถูกปรับตามเครื่องหมาย สารละลายที่ได้จะถูกผสมกับสารละลายไฮดราซีนคลอไรด์ 0.56 โมลาร์ 25 มล. สารละลายกรดโมโนไอโอโดอะซิติก 0.002 โมลาร์ 25 มล. สารละลายโซเดียมคาร์บอเนต 0.5% 100 มล. และน้ำกลั่น 25 มล. เก็บในตู้เย็น
บัฟเฟอร์ไทมอล-เวโรนัล- ในขวดวัดปริมาตรขนาด 100 มล. ผสมสารละลายบัฟเฟอร์ 80 มล. และสารละลายแอลกอฮอล์ไทมอล 10% 1 มล. เขย่าแล้วเติมสารละลายบัฟเฟอร์ที่เครื่องหมาย ค่า pH ควรเป็น 7.55
โอ-โทลูอิดีน รีเอเจนต์- ไธโอยูเรีย 0.15 กรัมละลายในกรดอะซิติกน้ำแข็ง 94 มล. และผสมกับโอโทลูอิดีนกลั่น 6 มล. เก็บในขวดสีเข้ม
ฟีนอลอิ่มตัวด้วยน้ำ- เติมน้ำ 35 มล. ลงในฟีนอลกลั่น 100 กรัม แล้วผสม โดยให้ความร้อนเล็กน้อยเพื่อเร่งการละลายฟีนอล
ฟีนอล์ฟทาลีน สารออกฤทธิ์- เตรียมโดยการละลายสาร 75 มก. ในสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 0.1 มล. สารละลายควรไม่มีสีหรือสีชมพูเล็กน้อยไม่เหมาะสำหรับการใช้งาน เพื่อเพิ่มความเสถียรของรีเอเจนต์จึงเติมไทรลอน 3 มก. ลงไปซึ่งโดยการจับเกลือของโลหะหนักจะป้องกันการเกิดออกซิเดชันของฟีนอล์ฟทาลีนกับออกซิเจนในบรรยากาศ
ไฟบริน- ไฟบรินในเลือดวัวจะถูกชะล้างจากเม็ดสีเลือดในน้ำไหลเป็นเวลาหลายวันจนกระทั่งเกิดก้อนสีขาว น้ำถูกบีบออก และไฟบรินซึ่งเต็มไปด้วยกลีเซอรีนจะถูกเก็บไว้ในขวดที่ปิดสนิท ก่อนใช้งาน ไฟบรินจะถูกล้างจากกลีเซอรีน
รีเอเจนต์ฟอสฟอรัส-วานิลลิน- กรดออร์โธฟอสฟอริกเข้มข้น 4 ส่วน (โดยปริมาตร) ผสมกับ 1 ส่วนของ 0.6% สารละลายที่เป็นน้ำวานิลลิน รีเอเจนต์จะถูกเก็บไว้ในภาชนะแก้วสีเข้มที่อุณหภูมิห้อง
ฟรุกโตส 1,6-บิสฟอสเฟต เกลือโซเดียม- สารละลายเกลือโซเดียมฟรุกโตส-1,6-บิสฟอสเฟต 2.0 มล. 10% ของเกลือโซเดียม 10% เจือจางในขวดขนาด 25 มล. พร้อมน้ำจนถึงเครื่องหมาย มีความคงตัวเมื่อเก็บในตู้เย็น
รีเอเจนต์สีสำหรับยูเรีย- ยาเม็ดจากชุดทดสอบยูเรียที่ประกอบด้วยไดอะซิติลโมโนไซม์และไทโอเซมิคาร์บาไซด์จะถูกละลายในขวดขนาด 50 มล. ในขณะที่ให้ความร้อน สารละลายมีความเสถียรเป็นเวลาสามสัปดาห์ ก่อนใช้งาน ให้ผสมสารละลายที่เตรียมไว้ในปริมาณเท่ากันกับสารละลายกรดซัลฟิวริก 9.6%
สารละลายอัลคาไลน์ β-กลีเซอโรฟอสเฟต- เติมโซเดียม β-กลีเซอโรฟอสเฟต 1 กรัม และเมดินาล 0.85 กรัม ลงในขวดวัดปริมาตรขนาด 100 มล. เติมน้ำกลั่นประมาณ 30 มล. ละลายและปรับปริมาตรจนถึงเครื่องหมายด้วยน้ำ ในขวดปริมาตรขนาด 100 มล. อีกขวด ให้เติมสารละลาย β-กลีเซอรอฟอสเฟตที่เตรียมไว้ 50 มล., สารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 0.1 โมลาร์ 2.8 มล. และปรับด้วยน้ำกลั่นจนถึงเครื่องหมาย (สารละลาย pH 8.6) ใช้โทลูอีนประมาณ 3 มล. กับของเหลว เก็บสารละลายไว้ในตู้เย็นไม่เกิน 10 วัน
PBS (น้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต) เป็นบัฟเฟอร์ที่ใช้กันทั่วไปสำหรับการย้อมสีอิมมูโนฮิสโตเคมี และมักใช้ในการวิจัยทางชีววิทยา ความเข้มข้นของออสโมลาริตีและไอออนของสารละลายสอดคล้องกับความเข้มข้น ร่างกายมนุษย์(ไอโซโทนิก)
PBS เป็นสารละลายน้ำที่ประกอบด้วยโซเดียมไฮโดรเจนฟอสเฟต โซเดียมคลอไรด์ และในบางกรณี โพแทสเซียมคลอไรด์และโพแทสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต
การย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนต์สำหรับ IHC
การย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์เป็นวิธีการย้อมอิมมูโนฮิสโตเคมี (IHC) วิธีแรก ด้วยพื้นฐานของปฏิกิริยาการจับแอนติเจน-แอนติบอดี แอนติเจนจะมองเห็นได้โดยใช้สีย้อมเรืองแสงเมื่อเชื่อมต่อกับแอนติบอดี กระบวนการนี้เกิดขึ้นเมื่อถูกกระตุ้นด้วยแสงกระตุ้นที่มีความยาวคลื่นจำเพาะภายใต้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ อิมมูโนฮิสโตเคมีหมายถึงกระบวนการตรวจหาแอนติเจน (เช่น โปรตีน) ในเซลล์ของส่วนของเนื้อเยื่อโดยใช้หลักการของแอนติบอดีที่จับกับแอนติเจนในเนื้อเยื่อชีวภาพโดยเฉพาะ
การใช้น้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (PBS)
น้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟตมีประโยชน์หลายอย่างเนื่องจากมีไอโซโทนิกและไม่เป็นพิษต่อเซลล์ส่วนใหญ่ สามารถใช้เจือจางสารและใช้ล้างภาชนะที่มีเซลล์อยู่ได้ PBS สามารถใช้เป็นตัวเจือจางในวิธีการทำให้แห้งของชีวโมเลกุลได้ เนื่องจากโมเลกุลของน้ำที่อยู่ภายในจะมีโครงสร้างล้อมรอบสาร (เช่น โปรตีน) เพื่อ "ทำให้แห้ง" และตรึงไว้กับพื้นผิวแข็ง
ฟิล์มน้ำบางๆ ที่เกาะติดกับสารจะป้องกันการเสียสภาพหรือการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างอื่นๆ บัฟเฟอร์คาร์บอเนตสามารถใช้เพื่อจุดประสงค์เดียวกันได้ แต่มีประสิทธิภาพน้อยกว่า PBS ยังสามารถใช้เพื่อจัดให้มีสเปกตรัมอ้างอิงเมื่อตรวจวัดการดูดซับโปรตีนในทรงรี
การเตรียมพีบีเอส
มีมากมาย วิธีการที่แตกต่างกันการเตรียมพีบีเอส
บางสูตรไม่มีโพแทสเซียม ในขณะที่บางสูตรมีแคลเซียมหรือแมกนีเซียม สูตรบัฟเฟอร์ด้านล่างนี้ซึ่งค่อนข้างง่ายคือสำหรับสารละลายสต๊อก PBS 10 เท่า (0.1M) สามารถเพิ่ม Tween ได้ด้วย กระบวนการทั้งหมดใช้เวลาประมาณ 10 นาที
วิธีทำน้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (PBS)
- ชั่งน้ำหนักดังต่อไปนี้: โซเดียมฟอสเฟตไดเบสิกชนิดไม่มีน้ำ 9 กรัม (Na2HPO4), โซเดียมฟอสเฟตชนิดไม่มีน้ำชนิดโมโนเบสิก 3.2 กรัม (NaH2PO4) และโซเดียมคลอไรด์ (NaCl) 90 กรัม
- ละลายสิ่งที่กล่าวมาทั้งหมดในน้ำกลั่นเพียง 1 ลิตร
- ปรับค่า pH เป็น 7 4.
- ทำสารละลายให้ได้ปริมาตรสุดท้าย 1 ลิตร
- (ไม่จำเป็น). สำหรับสารละลายที่มี Tween 20 0.5% ให้เติม Tween 20 5 มล. ลงในสารละลาย 1 ลิตร
- เจือจาง 10 เท่าก่อนใช้และปรับ pH หากจำเป็น
- เก็บที่อุณหภูมิห้อง
- สารตั้งต้นที่ไม่ใช่สารตั้งต้นสามารถทดแทนได้ แต่คุณจะต้องคำนวณมวลที่เหมาะสมของสารแต่ละตัวใหม่เพื่อรองรับโมเลกุลของน้ำที่เติมเข้าไป
คุณต้องมีอะไรบ้างเพื่อสร้างบัฟเฟอร์ PBS
- โซเดียมฟอสเฟตเฟสเดียว (ไม่มีน้ำ)
- Dibasic โซเดียมฟอสเฟต (ไม่มีน้ำ)
- โซเดียมคลอไรด์
- เรือขนาดและน้ำหนัก
- เครื่องกวนและเครื่องกวนแบบแม่เหล็ก > หัววัด pH สารละลายที่สอบเทียบแล้วเหมาะสำหรับการปรับ pH
- ขวดปริมาตร 1 ลิตร
- ทวีน 20 (ไม่จำเป็น)
